转基因马铃薯PH05-026-0048的实时荧光检测引物、方法和试剂盒.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115852020A(43)申请公布日2023.03.28(21)申请号202211131909.1(22)申请日2022.09.16(71)申请人广州海关技术中心地址510000广东省广州市珠江新城花城大道66号广东国检大厦B座申请人黄埔海关技术中心(72)发明人刘二龙卢丽关丽军李志勇魏霜郑冠津(74)专利代理机构广州科粤专利商标代理有限公司44001专利代理师刘明星朱聪聪(51)Int.Cl.C12Q1/6895(2018.01)C12Q1/6851(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书2页说明书5页序列表（电子公布）附图2页(54)发明名称转基因马铃薯PH05-026-0048的实时荧光检测引物、方法和试剂盒(57)摘要本发明公开了转基因马铃薯PH05‑026‑0048的实时荧光检测引物、方法和试剂盒。本发明针对PH05‑026‑0048转基因马铃薯特异性序列设计引物和探针，建立PH05‑026‑0048转基因马铃薯特异性实时荧光PCR检测方法，具有特异性好、灵敏度高、可重复性良好等优点，扩增效率为90％，定量检测下限为0.01％。有效的解决了现有技术中无PH05‑026‑0048转基因马铃薯特异性精准定量检测技术的问题，该方法可应用于进出境口岸检验检疫、国内农业产品食品监管的PH05‑026‑0048转基因马铃薯及其产品的检测。CN115852020ACN115852020A权利要求书1/2页1.一种转基因马铃薯PH05‑026‑0048特异性实时荧光PCR检测引物组，包括检测引物和检测探针，其特征在于：所述的检测引物如下所示：PH05‑026‑0048‑3F：5’‑GACGTCCGCAATGTGTTATTAAGTT‑3’；PH05‑026‑0048‑3R：5’‑TGTACTTCCAGTTCCCAATTGACTAC‑3’；所述的检测探针如下所示：PH05‑026‑0048‑3P：5’‑AAGTTGTCCTTGGTTTTAT‑3’，探针的5’端标记有荧光报告基团，3'端标记有荧光淬灭基团。2.根据权利要求1所述的转基因马铃薯PH05‑026‑0048特异性实时荧光PCR检测引物组，其特征在在于，所述的荧光报告基团为VIC，所述的荧光淬灭基团为BHQ1。3.一种转基因马铃薯PH05‑026‑0048特异性实时荧光PCR检测试剂盒，包括实时荧光定量PCR反应液、耐热DNA聚合酶、检测引物和检测探针，其特征在于：所述的检测引物如下所示：PH05‑026‑0048‑3F：5’‑GACGTCCGCAATGTGTTATTAAGTT‑3’；PH05‑026‑0048‑3R：5’‑TGTACTTCCAGTTCCCAATTGACTAC‑3’；所述的检测探针如下所示：PH05‑026‑0048‑3P：5’‑AAGTTGTCCTTGGTTTTAT‑3’，探针的5’端标记有荧光报告基团，3'端标记有荧光淬灭基团。4.根据权利要求3所述的转基因马铃PH05‑026‑0048薯特异性实时荧光PCR检测试剂盒，其特征在在于，所述的荧光报告基团为VIC，所述的荧光淬灭基团为BHQ1。5.一种转基因马铃薯PH05‑026‑0048特异性实时荧光PCR检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)提取待测样品的基因组DNA作为模板；(2)加入权利要求1所述的检测引物和检测探针，与实时荧光定量PCR反应液及耐热DNA聚合酶混合形成扩增反应体系；(3)将扩增反应体系在荧光PCR仪上进行实时荧光PCR反应，反应结束后，根据扩增曲线判断样品是否为转基因马铃薯PH05‑026‑0048。6.根据权利要求5所述的转基因马铃薯PH05‑026‑0048特异性实时荧光PCR检测方法，其特征在于，所述的步骤(3)的根据扩增曲线判断样品是否为转基因马铃薯PH05‑026‑0048的标准为：如果扩增曲线有典型荧光扩增曲线，则说明样品为PH05‑026‑0048转基因马铃薯；如果扩增曲线无典型荧光扩增曲线，则说明样品不是转基因马铃薯PH05‑026‑0048。7.根据权利要求5所述的转基因马铃薯PH05‑026‑0048特异性实时荧光PCR检测方法，其特征在于，所述的步骤(2)的扩增反应体系为：25μL，包括PremixExTaq12.5μL，ROXReferenceDyeII0.2μL，10μmol/L检测引物PH05‑026‑0048‑3F0.5μL，10μmol/L检测引物PH05‑026‑0048‑3R0.5μL，10μmol/L检测探针PH05‑026‑0048‑3P0.5μL，DNA模板2μL和ddH2O8.8μL；所述的步骤(3)的实时荧光PCR反应，其反应程序为95℃30s；95