一组检测猪传染性胃肠炎病毒的引物和探针及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115852051A(43)申请公布日2023.03.28(21)申请号202211408922.7(22)申请日2022.11.11(71)申请人青岛农业大学地址266109山东省青岛市城阳区长城路700号(72)发明人仇德洋陈虎杨大为姜国骞单虎(74)专利代理机构北京盛询知识产权代理有限公司11901专利代理师刘静(51)Int.Cl.C12Q1/70(2006.01)C12Q1/6844(2018.01)C12N15/11(2006.01)C12R1/93(2006.01)权利要求书1页说明书7页序列表（电子公布）附图4页(54)发明名称一组检测猪传染性胃肠炎病毒的引物和探针及其应用(57)摘要本发明公开了一组检测猪传染性胃肠炎病毒的引物和探针及其应用，属于病毒检测领域。引物和探针包括：TGEVF1如SEQIDNO：1所示，TGEVR2如SEQIDNO：3所示，TGEVPro如SEQIDNO：5所示；其中，所述TGEVPro的5'端标记荧光基团，所述TGEVPro的第31位碱基替换为四氢呋喃，3'末端标记聚合酶延伸阻断基团。本发明能高灵敏度、特异性检测猪传染性胃肠炎病毒，并且具备成本低、便于携带、不受实验室仪器限制可以现场检测，适合应用于基层人员和偏远地区在猪传染性胃肠炎病毒快速检测中。CN115852051ACN115852051A权利要求书1/1页1.一组检测猪传染性胃肠炎病毒的引物和探针，其特征在于，包括：TGEVF1：5'‑ATAGGTAATAGGGACCAACAGATTGGTTAT‑3'；TGEVR2：5'‑GCATGAGGTCCAGTGCCTAAGTAGTAGAAG‑3'；TGEVPro：5'‑CGCTATCGCATGGTGAAGGGCCAACGTAAAGAGCTTCCTGAAAGAGA‑3'；其中，所述TGEVPro的5'端标记荧光基团，所述TGEVPro的第31位碱基替换为四氢呋喃，所述TGEVPro的3'端标记聚合酶延伸阻断基团。2.如权利要求1所述的引物和探针，其特征在于，所述荧光基团包括FAM基团；所述聚合酶延伸阻断基团包括C3‑Spacer。3.如权利要求1所述的引物和探针，其特征在于，所述TGEVR2的5'端用生物素标记。4.一种检测或诊断猪传染性胃肠炎病毒的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1‑3任一项所述的引物和探针。5.如权利要求1‑3任一项所述的引物和探针的应用，其特征在于，包括如下任一项：(1)在制备检测猪传染性胃肠炎病毒的试剂盒中的应用；(2)在制备诊断猪传染性胃肠炎病毒感染情况的试剂盒中的应用。6.一种非疾病诊断目的的检测猪传染性胃肠炎病毒的方法，其特征在于，包括以下步骤：以待测样品的RNA或DNA为模板，利用权利要求1‑3任一项所述的引物和探针扩增，通过扩增产物判定是否为猪传染性胃肠炎病毒。7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，扩增反应体系包括：TGEVF12μL、TGEVR22μL、TGEVPro0.6μL、RNA模板5μL，补充至50μL。8.如权利要求6所述的方法，其特征在于，扩增反应程序为：37℃孵育反应15min。9.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述检测包括电泳检测或者侧流层析试纸条检测。10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，采用侧流层析检测时，若试纸条出现两条红色的带，一条位于质控区，一条位于检测区，表明待测样品中含有猪传染性胃肠炎病毒或达到了试纸条的最低检出量；若试纸条质控区出现一条红色带，检测区没有条带，表明待测样品中不含有猪传染性胃肠炎病毒或低于试纸条最低检出量；若试纸条质控区和检测区均未出现条带，说明使用的试纸条或者扩增试剂损坏、失效或者操作有误。2CN115852051A说明书1/7页一组检测猪传染性胃肠炎病毒的引物和探针及其应用技术领域[0001]本发明涉及病毒检测领域，特别是涉及一组检测猪传染性胃肠炎病毒的引物和探针及其应用。背景技术[0002]猪传染性胃肠炎病毒(Porcinetransmissiblegastroenteritisvirus,TGEV)属于冠状病毒科(Coronaviridae)甲型冠状病毒属(Alphacoronovirus)，病毒粒子呈多形性，大多数为圆形和椭圆形，单链正股不分节段RNA，直径90～200nm，表面有囊膜。复制过程以及病毒蛋白的表达与其他冠状病毒类似。TGEV的基因组RNA具有传染性，基因长度在28kb左右，其中5'端具有一个长约209‑528nt的非编码区，此外5'末端还包含一个以AUG作为起始密码子的开放阅读框；3'端的非编码区长约288‑506nt。可编码参与水解加工、病毒基因组复制和翻译共需要15种蛋白，完整的TGEV包含4种结构蛋