一种快速检测BCoV滴度和中和抗体的HA/HI检测试剂盒.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115877002A(43)申请公布日2023.03.31(21)申请号202211692263.4(22)申请日2022.12.28(71)申请人黑龙江八一农垦大学地址163000黑龙江省大庆市高新技术开发区新风路5号(72)发明人周玉龙任亚超李旭阳白勇戴观丽张佳雯赵帅陈秋会郭讼孔祥鹤伍海亮夏立勇张国华高伟(74)专利代理机构沈阳一诺君科知识产权代理事务所(普通合伙)21266专利代理师刘丽娟(51)Int.Cl.G01N33/569(2006.01)G01N33/68(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图1页(54)发明名称一种快速检测BCoV滴度和中和抗体的HA/HI检测试剂盒(57)摘要本发明属于细胞工程领域，具体公开了一种快速检测BCoV滴度和中和抗体的HA/HI检测试剂盒，由以下组分组成：灭活的BCoV病毒，1mL；含0.1％小牛血清白蛋白BSA的PBS缓冲液，30mL；阳性血清对照：牛源BCoV抗体阳性血清；阴性血清对照：牛源BCoV抗体阴性血清；红细胞：1％新鲜中华仓鼠红细胞或醛化的1％中华仓鼠红细胞悬液。本发明的试剂盒使用时操作简便，节省时间，实验操作简便1小时内可出结果，为今BCoV鉴定和疫苗免疫效果评价提供了方便快捷的手段。CN115877002ACN115877002A权利要求书1/1页1.一种快速检测BCoV滴度和中和抗体的HA/HI检测试剂盒，其特征在于，由以下组分组成：灭活的BCoV病毒，1mL；含0.1％小牛血清白蛋白BSA的PBS缓冲液，30mL；阳性血清对照：牛源BCoV抗体阳性血清；阴性血清对照：牛源BCoV抗体阴性血清；红细胞：1％新鲜中华仓鼠红细胞或醛化的1％中华仓鼠红细胞悬液。2.根据权利要求1所述的快速检测BCoV滴度和中和抗体的HA/HI检测试剂盒，其特征在8.0于：所述灭活的BCoV病毒的病毒滴度为10TCID50/mL。3.根据权利要求1所述的快速检测BCoV滴度和中和抗体的HA/HI检测试剂盒，其特征在于：所述PBS缓冲液的pH为7.2。4.根据权利要求1所述的快速检测BCoV滴度和中和抗体的HA/HI检测试剂盒，其特征在于：所述牛源BCoV抗体阳性血清的HI价为1:64。5.根据权利要求1所述的快速检测BCoV滴度和中和抗体的HA/HI检测试剂盒，其特征在于：所述牛源BCoV抗体阴性血清的HI价小于等于1:2。6.根据权利要求1所述的快速检测BCoV滴度和中和抗体的HA/HI检测试剂盒，其特征在于：所述1％新鲜中华仓鼠红细胞或醛化的1％中华仓鼠红细胞悬液由以下方法获得：1)制备中华仓鼠红细胞采集健康成年中华仓鼠的新鲜抗凝血；然后用等量生理盐水悬浮，3000r/min离心5min，弃掉上清液及白细胞，重复3遍，获得中华仓鼠红细胞；然后用阿氏液将中华仓鼠红细胞混匀，于4℃备用；2)中华仓鼠红细胞的醛化取中华仓鼠红细胞离心沉淀，弃上清液，再用压积中华仓鼠红细胞10‑20倍体积的生理盐水洗涤离心3次；再按0.1mL压积中华仓鼠红细胞与2.5mLpH为7.2的PBS缓冲液混合摇匀；然后边摇边滴加2.5％戊二醛0.1mL，置摇床上在室温中继续摇动60min；用pH为7.2的PBS缓冲液洗三次，再用蒸馏水洗两次；最后用0.01硫柳汞生理盐水配成10％中华仓鼠红细胞悬液，置4℃冰箱中保存备用；3)配制1％新鲜中华仓鼠红细胞或醛化的1％中华仓鼠红细胞取含0.1％小牛血清白蛋白BSA的PBS缓冲液9mL，加入0.1mL上述新鲜的中华仓鼠红细胞或10％中华仓鼠红细胞悬液，混合均匀，配制成1％新鲜中华仓鼠红细胞或醛化的1％中华仓鼠红细胞。2CN115877002A说明书1/5页一种快速检测BCoV滴度和中和抗体的HA/HI检测试剂盒技术领域[0001]本发明涉及细胞工程领域，特别是一种快速检测BCoV滴度和中和抗体的HA/HI检测试剂盒。背景技术[0002]牛冠状病毒(Bovinecoronavirus,BCoV)是20世纪70年代发现的牛腹泻病原，临床上主要表现为新生犊牛腹泻、拉血样粪便、成年牛冬季严重水样腹泻(有时伴有血和黏液)等特征。该病主要通过消化道和呼吸道传播，发病率高。一旦发病极易引起群体感染，并且诱发继发感染，给以集约化饲养为特点的养牛业造成巨大的经济损失。目前临床上主要以灭活疫苗和减毒活疫苗的防控为主，但灭活疫苗和减毒活疫苗存在生物危害性和遗传变异致使原疫苗效力丧失等问题。因此，需要对疫苗免疫效果进行评价，目前国内尚无有效的快速检测牛冠状病毒滴度和中和抗体的HA/HI检测试剂盒。发明内容[0003]为了解决上述技术问题，本发明提供了一种快速检测BCoV滴度和中和抗体的HA/HI检测试剂盒，操作简便，节省时间，