检测噻苯咪唑的时间分辨荧光免疫试剂盒及其检测方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109752520A(43)申请公布日2019.05.14(21)申请号201711073458.X(22)申请日2017.11.05(71)申请人江苏维赛科技生物发展有限公司地址212009江苏省镇江市丁卯新区国家科技园B11栋3楼(72)发明人杜霞洪霞张淑雅(51)Int.Cl.G01N33/53(2006.01)G01N33/531(2006.01)G01N33/543(2006.01)权利要求书1页说明书5页(54)发明名称检测噻苯咪唑的时间分辨荧光免疫试剂盒及其检测方法(57)摘要本发明公开了一种检测噻苯咪唑的时间荧光分辨荧光免疫分析试剂盒及其检测方法。所述检测噻苯咪唑的时间分辨荧光免疫分析检测试剂盒是由多孔包被板、缓冲液、噻苯咪唑标准品、噻苯咪唑的抗体冻干品、铕标记的羊抗鼠抗体、洗涤液和增强液所组成。所述检测噻苯咪唑的时间荧光免疫分析试剂盒的检测方法包括下列步骤：(1)免疫原的制备；(2)包被原的制备；(3)单克隆抗体的制备；(4)样品的前处理及检测。本发明检测时间短、平均回收率高、样品前处理简单、能现场操作检测，应用广泛，检测成本低，同时具有检测特异性强，批内和批间差异小、灵敏度高和操作简单快速，且特别适合于大批量样品的检测等优点。CN109752520ACN109752520A权利要求书1/1页1.一种检测噻苯咪唑的时间分辨荧光免疫分析试剂盒，其特征在于：由多孔包被板，缓冲液，噻苯咪唑标准品，噻苯咪唑的抗体冻干品，铕标记的羊抗鼠抗体，洗涤液和增强液所组成。2.一种根据权利要求1所述检测噻苯咪唑的时间分辨荧光免疫分析试剂盒的检测方法，包括免疫原、包被原和单克隆抗体的制备以及样品前处理，其特征在于：将噻苯咪唑与牛血清白蛋白偶联，得到免疫原；将噻苯咪唑与卵血清蛋白偶联，得到包被原；（3）用步骤（1）的免疫原免疫小鼠，通过杂交瘤技术，得到分泌抗噻苯咪唑的单克隆抗体的杂交瘤细胞株；（4）以体内诱生腹水法大量制备抗体，使用ProteinG柱进行纯化，获得抗噻苯咪唑的单克隆抗体用步骤(2)的包被原包被固相载体；（6）将动物组织先经过酸解提取后，再过MAX柱净化，最后加入衍生试剂和催化剂进行处理，得到待测产物；（7）将步骤（6）的待检物进行测量荧光强度cps，对照标准曲线计算样品中的噻苯咪唑含量。3.根据权利要求1所述检测噻苯咪唑的时间荧光免疫分析法试剂盒的检测方法，其特征在于：所述的固相载体是多孔包被板，采用96孔的多微孔包被板作为固相载体。4.根据权利要求1所述检测噻苯咪唑的时间荧光分辨免疫分析法试剂盒的检测方法，其特征在于：所述的衍生试剂是丁胺。5.根据权利要求1所述检测噻苯咪唑的时间分辨荧光免疫分析法试剂盒的检测方法，其特征在于：所述的催化剂是腈基磷酸二乙酯。6.根据权利要求1所述检测噻苯咪唑的时间荧光免疫分析法试剂盒的检测方法，其特征在于：所述步骤(6)和(7)具体为取包被有噻苯咪唑-OVA的微孔包被板，加入50µL处理好的样品到各自的微孔中，加入50µL以缓冲液稀释的噻苯咪唑抗体，25~37℃振荡0.5~1小3+时，洗涤液洗三次，加以缓冲液稀释的100µLEu-羊抗鼠抗体，25~37℃振荡0.5~1小时，洗涤液洗六次，加200µL增强液振荡5分钟后测量荧光强度cps，从标准曲线计算样品中的噻苯咪唑含量。2CN109752520A说明书1/5页检测噻苯咪唑的时间分辨荧光免疫试剂盒及其检测方法技术领域[0001]本发明属于生物检测领域，具体的说，涉及一种检测噻苯咪唑的时间分辨荧光免疫分析试剂盒及其检测方法。背景技术[0002]噻苯咪唑是目前经常使用的防腐保鲜剂，常用于采收前或采收后的果蔬，经喷雾或浸蘸后的果蔬，不但可以延长贮存时间，还可保鲜、保色。这些食品添加剂具有一定的生物毒性效应，残留量超标将不可避免对人体健康产生影响。我国对这些杀菌剂有明确的残留限量要求团，国家质检总局发布公告，禁止对轻基苯甲酸丙醋等33种产品作为食品添加剂生产、销售和使用，省质监局已停止受理其生产许可申请闭，其中包含噻苯咪唑。[0003]目前，国内外报道的果蔬残留防腐剂的检测方法主要涉及有分光光度法、胶束电动色谱法困、高相液相色谱法、液相色谱串联质谱法、气相色谱串联质谱法等，在各种检测方法的建立，样品前处理是不可缺少的前提条件，尤其是针对痕量分析时，样品前处理是影响分析结果的关键环节，常引起样品检测误差，限制检测灵敏度，尽管提取净化方法有索氏提取、振荡提取、液一液分配、柱层析等技术，虽然这些技术不需要昂贵的设备和特殊仪器，但却是整个分析过程中费时费力、易引起误差的环节；且大量有机溶剂的使用，易造成对环境的污染。因此，需要发明一种工序少、操作简便检测的新方法。[0004