海龟疫苗及其制备方法和应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115944720A(43)申请公布日2023.04.11(21)申请号202211559335.8(74)专利代理机构广州广典知识产权代理事务(22)申请日2022.12.06所(普通合伙)44365专利代理师万志香(83)生物保藏信息CCTCCNO:M202216812022.10.28(51)Int.Cl.CCTCCNO:M202216822022.10.28A61K39/116(2006.01)A61K39/106(2006.01)(71)申请人广东惠东海龟国家级自然保护区管A61K39/39(2006.01)理局A61P31/04(2006.01)地址516359广东省惠州市惠东县港口滨海旅游度假区海龟湾申请人广东省农业科学院动物卫生研究所(72)发明人叶明彬陈华灵王付民刘振兴马艳平冯国清梁志凌马江耀麦瑞琼李满文观玉安权利要求书1页说明书18页序列表（电子公布）附图9页(54)发明名称海龟疫苗及其制备方法和应用(57)摘要本发明涉及一种海龟疫苗及其制备方法和应用，所述海龟疫苗的免疫原由副溶血弧菌H0711的灭活菌株和/或哈维氏弧菌TL0816的灭活菌株制备而成，所述副溶血弧菌H0711的保藏编号为CCTCCNo：M20221681，所述哈维氏弧菌TL0816的保藏编号为CCTCCNo：M20221682。本发明获得对海龟具有较强保护力的菌株副溶血弧菌H0711和哈维氏弧菌TL0816，可将其制备成灭活疫苗应用到绿海龟身上获得对细菌的免疫力保护，特别是制备成合适的二联苗，相对保护率达到75％，可用于预防和治疗海龟细菌感染，这对于提高绿海龟对特定病原菌的免疫能力有重要意义。CN115944720ACN115944720A权利要求书1/1页1.一种海龟疫苗，其中，其免疫原由副溶血弧菌H0711的灭活菌株和/或哈维氏弧菌TL0816的灭活菌株制备而成，所述副溶血弧菌(Vibrioparahemolyticus)H0711的保藏编号为CCTCCNo：M20221681，所述哈维氏弧菌(Vibrioharveyi)TL0816的保藏编号为CCTCCNo：M20221682。2.根据权利要求1所述的海龟疫苗，其中，所述海龟是绿海龟。3.根据权利要求1所述的海龟疫苗，其中，其免疫原由副溶血弧菌H0711的灭活菌株和哈维氏弧菌TL0816的灭活菌株制备而成。4.根据权利要求1所述的海龟疫苗，其中，所述副溶血弧菌H0711的灭活菌株和哈维氏弧菌TL0816的灭活菌株的用量比为1‑3：1‑3，优选为0.9‑1.1：0.9‑1.1，更优选为1：1。5.根据权利要求1‑4任一项所述的海龟疫苗，其中，还包括疫苗佐剂。6.根据权利要求5所述的海龟疫苗，其中，所述疫苗佐剂为铝盐佐剂。7.根据权利要求1‑4任一项所述的海龟疫苗，所述副溶血弧菌H0711的灭活菌株和/或哈维氏弧菌TL0816的灭活菌株的菌液浓度分别为1×108cfu/mL至2×109cfu/mL。8.根据权利要求7所述的海龟疫苗，其中，所述副溶血弧菌H0711的灭活菌株和/或哈维氏弧菌TL0816的灭活菌株的菌液浓度为5×108cfu/mL至1×109cfu/mL。9.一种权利要求1‑8所述的海龟疫苗的制备方法，其中，包括以下步骤：将培养的副溶血弧菌H0711灭活，得H0711灭活菌液；将培养的哈维氏弧菌TL0816灭活，得TL0816灭活菌液；将H0711灭活菌液和TL0816灭活菌液混合。10.权利要求1‑8所述的海龟疫苗在制备预防和治疗海龟副溶血弧菌和/或哈维氏弧菌感染中的药物中的应用。2CN115944720A说明书1/18页海龟疫苗及其制备方法和应用技术领域[0001]本发明涉及生物技术领域，具体是涉及海龟疫苗及其制备方法和应用。背景技术[0002]海龟是恐龙时代遗留下来的“活化石”，具有很大的经济、科研、观赏、文化和生态价值。其中，绿海龟(学名：Cheloniamydas)海龟科海龟属的一种龟，目前已被列入《华盛顿公约》附录Ⅰ名录、《世界自然保护联盟》(IUCN)濒危物种以及《中国国家重点保护野生动物名录》一级。近年来，人为的捕捞和生态环境的破坏，绿海龟数量极具减少，因此坚守好绿海龟的保育工作尤为重要。[0003]随着绿海龟人工繁殖技术的成熟，病害问题也阻碍着保育工作的顺利前进。海水中存在着大量的海洋微生物，有细菌、真菌、寄生虫和寄生生物等，因水质的恶劣，个体的免疫力下降，食物的不适应性等均为导致绿海龟疾病的爆发。由于绿海龟是国家一级保护动物，关于其常见病原菌和易感病原菌鲜有报道，对于预防和治疗工作的开展有较大难度。基于绿海龟最终必须要回归海洋，因此我们在增强绿海龟的抗病能力上做研究，针对病原菌开发的疫苗更为有