一种降低菜豆离体再生体系褐化的方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115968787A(43)申请公布日2023.04.18(21)申请号202310138169.2(22)申请日2023.02.20(71)申请人广西农业职业技术大学地址530007广西壮族自治区南宁市西乡塘区大学东路176号(72)发明人吴小丽张慧娜马留辉苏绍烊覃连红韦媛余江敏莫龙萍戴霏李熠庆(74)专利代理机构南宁智卓专利代理事务所(普通合伙)45129专利代理师谭月萍(51)Int.Cl.A01H4/00(2006.01)权利要求书1页说明书4页(54)发明名称一种降低菜豆离体再生体系褐化的方法(57)摘要本发明公开了一种降低菜豆离体再生体系褐化的方法，包括初代培养及生根培养，其中，所述初代培养包括以下步骤：选取饱满新鲜的种子，预处理后，接种于含MS培养基中，诱发形成无菌苗；用灭菌解剖刀从所得无菌苗上小心切取子叶节，将子叶节接种于防褐化培养基中，培养1周；然后切去主腋芽，再转瓶到防褐化培养基内继代培养，继代培养2周即可。其中防褐化培养基由基础培养基及外源物质组成。本发明通过预处理诱发形成无菌苗，再将子叶节接种于防褐化培养基中进行初代培养及继代培养，有效改善了菜豆离体再生培养的褐化现象，褐化率降到15.36％以下，炼苗移栽后成活率达89％。CN115968787ACN115968787A权利要求书1/1页1.一种降低菜豆离体再生体系褐化的方法，其特征在于：包括初代培养及生根培养，其中，所述初代培养包括以下步骤：(1)选取饱满新鲜的种子，预处理后，接种于含MS培养基中，诱发形成无菌苗；(2)用灭菌解剖刀从所得无菌苗上小心切取子叶节，将子叶节接种于防褐化培养基中，培养1周；(3)然后切去主腋芽，再转瓶到防褐化培养基内继代培养，继代培养2周即可。2.根据权利要求1所述的一种降低菜豆离体再生体系褐化的方法，其特征在于：所述预处理为将选取的种子，用75％酒精消毒1min，然后用无菌水冲洗3次后备用；用0.1％HgCl2灭菌5min，完成后用无菌水冲洗5次，取出置于无菌滤纸上吸干种子表面水分，即可。3.根据权利要求1所述的一种降低菜豆离体再生体系褐化的方法，其特征在于：所述防褐化培养基由基础培养基及外源物质组成。4.根据权利要求3所述的一种降低菜豆离体再生体系褐化的方法，其特征在于：所述基础培养基为MS、MSB5及B5中的一种。5.根据权利要求3或4所述的一种降低菜豆离体再生体系褐化的方法，其特征在于：所述外源物质为6‑BA、抗坏血酸、硝酸银及活性炭中的一种。6.根据权利要求5所述的一种降低菜豆离体再生体系褐化的方法，其特征在于：所述6‑BA在基础培养基中的添加量为1‑2mg/L；所述抗坏血酸在基础培养基中的添加量为3‑5mg/L。7.根据权利要求5所述的一种降低菜豆离体再生体系褐化的方法，其特征在于：所述硝酸银在基础培养基中的添加量为20‑40mg/L；所述活性炭在基础培养基中的添加量为0.5‑1.5mg/L。8.根据权利要求1所述的一种降低菜豆离体再生体系褐化的方法，其特征在于：所述生根培养的步骤为：将继代培养诱导后的不定芽转入生根培养基中进行生根培养，培养的时间为12‑15天。2CN115968787A说明书1/4页一种降低菜豆离体再生体系褐化的方法技术领域[0001]本发明涉及植物组织培养技术领域，尤其涉及一种降低菜豆离体再生体系褐化的方法。背景技术[0002]菜豆(PhaseolusvulgarisL.)，又称芸豆(俗称二季豆或四季豆)，是食用人群最多的食用豆类。菜豆中含有丰富的蛋白质、碳水化合物、维生素、纤维素及矿物质，蛋白质含量约为3％～6％，是植物中丰富的蛋白库，基本上可以满足非洲和拉丁美洲等一些国家人口对蛋白质的需求；同时菜豆也被称为“补钙冠军”，其钙含量约为0.3％～0.4％，是黄豆的近两倍；普通菜豆籽粒富含铁、钙、镁、锰和钾等矿物质元素，具有高蛋白、中淀粉、低脂肪以及营养元素丰富等特点，是人类饮食中植物蛋白的重要来源，深受消费者的喜爱。普通菜豆在l5世纪从欧洲引入中国，已有500多年的栽培历史。目前，中国种植的普通菜豆大多为地方品种，主要分布于云南、贵州、山西、陕西、甘肃、内蒙古和黑龙江等省区，是中国主要的出口创汇商品之一。[0003]传统菜豆栽培种的产量低、病虫害严重，因此可以通过离体培养的方式来创新种质资源，选育新品种。菜豆离体培养研究国内仅有几例报道，且普遍存在诱导率不高、褐化严重的问题，褐化是植物离体再生培养中常见且不可避免的现象，尤其在豆科植物中。[0004]因此本领域技术人员提供了一种降低菜豆离体再生体系褐化的方法，以解决上述问题。发明内容[0005]本发明的目的在于提供一种诱导率高、低褐化率的降低菜豆离体再生体系褐化的方法。[0006