快速高效鉴定花生青枯病抗性的水培接种方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115976151A(43)申请公布日2023.04.18(21)申请号202211598436.6A01G31/00(2018.01)(22)申请日2022.12.12C12R1/01(2006.01)(71)申请人中国农业科学院油料作物研究所地址430062湖北省武汉市武昌区徐东二路2号(72)发明人晏立英廖伯寿雷永宋万朵罗怀勇姜慧芳康彦平陈玉宁淮东欣王欣王志慧(74)专利代理机构武汉开元知识产权代理有限公司42104专利代理师黄行军(51)Int.Cl.C12Q1/18(2006.01)C12N1/20(2006.01)A01G7/06(2006.01)权利要求书1页说明书8页附图3页(54)发明名称快速高效鉴定花生青枯病抗性的水培接种方法(57)摘要本发明涉及一种花生青枯病抗性的鉴定方法。快速高效鉴定花生青枯病抗性的水培接种方法，其特征在于包括如下步骤：1)、花生水培体系的建立：种子在蛭石中萌发；生长环境为添加1.1g/LMS培养基的水培液；2)、混合菌接种：将花生青枯菌株HA1、HA2和MC1分别培养，等浓度等体积混合后稀释到1*107CFU/ml接种花生；调查并计算存活率；3)、抗病性鉴定：存活率大于90％时，为高抗品种；存活率为80％～90％，为抗病品种；存活率为70％～80％，为中抗品种；存活率为50％～70％，为感病品种；存活率<50％，为高感品种。该方法所需时间短，方法简便，不受季节和田间的限制，较为准确的反映花生材料的抗性表现。CN115976151ACN115976151A权利要求书1/1页1.快速高效鉴定花生青枯病抗性的水培接种方法，其特征在于包括如下步骤：1)、花生水培体系的建立将花生品种播种到蛭石中，28℃±2℃条件下，16h光照+8h黑暗培养至下胚轴的长度为3～5cm，用海绵包裹住种子下胚轴固定在直径为2cm的多孔板上，将放满种子的多孔板盖在装满水的塑料盒上，每七天换水一次；在花生植株生长到6叶期时在水培盆中添加植物组织培养基本培养基MS(Murashige&Skoog)，设置终浓度为1.1g/L～2.2g/L；2)、混合菌接种青枯菌培养：将‑80℃保存的花生青枯菌株HA1、花生青枯菌株HA2和花生青枯菌株MC1分别划线培养于马铃薯葡萄糖琼脂培养基(potatodextroseagar,PDA)上，30℃下培养两天至菌落长出，挑取单菌落分别接种于5mL马铃薯葡萄糖液体培养基(potatodextrosebroth,PDB)中，200r/min振荡培养24h后，吸取1mL加入到100mL马铃薯葡萄糖液体培养基(potatodextrosebroth,PDB)中继续200r/min振荡培养48h，取1mL菌液利用NanoDropone超微量分光光度计测定OD600值(OD600＝1相当于1×109CFU/ml)，并将菌株分别稀释到1×107CFU/ml，然后将三个菌株等体积混合，得到浓度为1×107CFU/ml的青枯菌混合菌液；青枯菌接种：将步骤1)中水培条件下5～6叶期的花生植株取出，剪掉距离茎基部10cm以下的根系，将花生植株下部浸泡于1×107CFU/ml的青枯菌混合菌液中30min，再将花生植株转移至新鲜的无菌水中培养至枯萎症状显现；从枯萎症状显现开始，每天记录枯萎植株数，计算存活率，存活率＝(1‑枯萎株数/总株数)×100％；3)、抗病性的鉴定存活率大于90％时，为高抗品种；存活率为80％～90％，为抗病品种；存活率为70％～80％，为中抗品种；存活率为50％～70％，为感病品种；存活率<50％，为高感品种。2.根据权利要求1所述的快速高效鉴定花生青枯病抗性的水培接种方法，其特征在于，步骤1)中，塑料盒的长×宽×高：35×24.5×9.5㎝。2CN115976151A说明书1/8页快速高效鉴定花生青枯病抗性的水培接种方法技术领域[0001]本发明涉及一种花生青枯病抗性的鉴定方法，具体涉及一种快速高效鉴定花生青枯病抗性的水培接种方法。背景技术[0002]花生(ArachishypogaeaL)是我国重要的油料和经济作物之一，根据国家统计局发布的数据，2020年全国花生种植面积达到4780.83万公顷，总产达到1799.27万吨，不断创造历史新高。然而，我国花生受青枯病危害普遍较重，这种由雷尔氏青枯菌(Ralstoniasolanacearum)引起的土传细菌病害在长江流域及以南的广大花生产区以及北方局部产区均有发生，病地约占全国花生种植面积的1/10，危害面积居世界首位。花生青枯病从苗期到收获期均可发生，尤其以开花期最重，受害田块一般减产10％～30％，发病严重地块可导致绝收。由于青枯菌能在土壤中存活多年，防治难度大，最经济有效