一种花生青枯病田间初花期接种鉴定方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114651689A(43)申请公布日2022.06.24(21)申请号202210263588.4(22)申请日2022.03.17(71)申请人福建农林大学地址350002福建省福州市仓山区上下店路15号福建农林大学(72)发明人张冲庄伟建陈华蔡铁城杨强熊发前陈玉婷楚盼盼(74)专利代理机构福州元创专利商标代理有限公司35100专利代理师林文弘蔡学俊(51)Int.Cl.A01G22/40(2018.01)A01G7/06(2006.01)A01G7/00(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图1页(54)发明名称一种花生青枯病田间初花期接种鉴定方法(57)摘要本发明公开了一种花生青枯病田间初花期接种鉴定方法，包括如下步骤：将种植田块进行整地起垄，按照规格种植花生种质；选择青枯菌进行培养和摇菌，获得接种用青枯菌悬液；对初花期的花生种质材料采用剪叶接种法接种花生青枯病菌；接种后25天，记录接种花生青枯菌后发病等级的植株数目，计算病情指数，判断花生品种对花生青枯病的抗性等级。本发明的花生青枯病田间初花期接种鉴定方法，其鉴定结果准确可靠且重复性较高，可真实反映田间的青枯病抗性，可显著区分不同花生品种对青枯病的抗感差异，可一次性对多个待测品种的花生进行大批量的鉴定，实现规模化花生青枯病的抗病性鉴定。CN114651689ACN114651689A权利要求书1/1页1.一种花生青枯病田间初花期接种鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）培育接种用花生苗：选择土壤肥沃的黄壤土田块，犁地耙平后在起畦之前每亩均匀撒施基肥10kg和复合肥40kg，采用起垄栽培方式并且等行距种植，周围设置保护行，单粒播种，两行畦，畦宽0.9m，株行距0.45m×0.16m，根据出苗情况进行补苗，齐苗后每亩施尿素10kg，种植三个重复，每个重复种50株；（2）接种体制备：将‑80℃保存的强致病力青枯菌菌株Rs‑P.362200‑060707‑2‑2在TTC培养基上28℃培养48h活化，挑取活性的克隆于SPA培养基220rpm摇瓶震荡培养24h，制备接种用青枯菌菌液；（3）接种方法：对初花期的花生种质材料采用剪叶法接种处理，用无菌剪刀蘸取菌悬液，在花生植株倒数第二张完全展开的叶片的4片小叶的1/2处垂直于中脉剪2/3的半片叶，不要伤到中脉，同样的方法将第三张叶片接种，设3个重复，每个重复接种30株，用无菌水做对照；（4）调查方法：接种后25天，记录接种花生青枯菌后发病等级的植株数目，计算病情指数，病情等级分为0~5级6个级别，按照级别计算病情指数，病情指数=（∑各级症状代表值×株数/最高级症状代表值×总株数）×100；（5）抗性等级划分：根据花生植株的病情指数计算所得的最终得分,评价将花生种质资源分为高抗、抗病、中抗、中感、感病、高感青枯病。2.根据权利要求1所述的一种花生青枯病田间初花期接种鉴定方法，其特征在于：步骤(1)中所述的花生田间种植时间为4月初，生长30~35天。3.根据权利要求1所述的一种花生青枯病田间初花期接种鉴定方法，其特征在于：步骤(2)中所述的克隆在TTC固体培养基上强致病力的菌落为中间粉红色，周围白色，形状不规89则的菌落，制备接种用青枯菌的菌液浓度控制在10~10cfu/mL。4.根据权利要求1所述的一种花生青枯病田间初花期接种鉴定方法，其特征在于：步骤(4)中所述的0~5级标准是：0级：所剪小叶片切口褪绿变黄，未剪叶片未脱落保持绿色，植株完好未见凋萎；1级：找不到所剪小叶片所在的叶片，植株完好未见凋萎；2级：所剪叶片所在主茎或侧枝出现全部或部分叶片凋萎褪绿；3级：未剪侧枝叶片出现凋萎褪绿，但茎杆呈绿色；4级：整株凋萎死亡，所有枝条呈黄绿色；5级：整个植株干枯死亡。5.根据权利要求1所述的一种花生青枯病田间初花期接种鉴定方法，其特征在于：步骤(5)中的花生抗青枯病抗性评价标准：高抗HR：病情指数0～10；抗病R：病情指数11～30；中抗MR：病情指数31～50；中感或低抗MS或LS：病情指数51～70；感病S：病情指数71～90；高感HS：病情指数91～100。6.如权利要求1所述一种花生青枯病田间初花期接种鉴定方法在花生品种抗性筛选中的应用。2CN114651689A说明书1/5页一种花生青枯病田间初花期接种鉴定方法技术领域[0001]本发明属于植物青枯病抗性鉴定领域，具体涉及一种花生青枯病田间初花期接种鉴定方法。背景技术[0002]花生是我国重要的油料和经济作物，在我国国民生产中占有重要地位。我国是花生生产大国，2018年花生播种面积达4620千公顷，年总产量1733.20万吨，占全国油料年产量的50%。2018年我国进口食用油籽9448.9万吨，同比减少7.4