改进的全生育期人工病圃烟草品种青枯病抗性鉴定方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115530037A(43)申请公布日2022.12.30(21)申请号202211321165.XC12R1/01(2006.01)(22)申请日2022.10.26(71)申请人云南省烟草农业科学研究院地址650000云南省昆明市圆通街33号(72)发明人方敦煌(74)专利代理机构成都市鼎宏恒业知识产权代理事务所(特殊普通合伙)51248专利代理师吴佳洁(51)Int.Cl.A01G22/45(2018.01)A01G7/06(2006.01)G06Q10/06(2012.01)G06Q50/02(2012.01)C12N1/20(2006.01)权利要求书3页说明书9页附图1页(54)发明名称改进的全生育期人工病圃烟草品种青枯病抗性鉴定方法(57)摘要本发明公开了一种改进的全生育期人工病圃烟草品种青枯病抗性鉴定方法，包括病田寻访、布局诱发诊查、补接与诱发建立成熟病圃、病害调查评价抗性等4个步骤，本发明不需要先建立成熟病圃、再开展品种抗性鉴定，采用的病圃直接来源自然的零星发病田，在病田采用M垄2行纵横布局、均匀种植感病品种，作为病害指示植株，覆膜、滴灌造就了易于发病的温湿度条件，建立零星发病的病圃，再通过定向补接、补救接种均一化病圃，病圃经过或不经过条块状病圃、最终发展为成熟病圃，建立成熟病圃的同时完成品种的抗病性鉴定，缩短了建立成熟病圃2‑3年的时间，提高了烟草青枯病病圃抗性鉴定的时效性和规模化。CN115530037ACN115530037A权利要求书1/3页1.一种改进的全生育期人工病圃烟草品种青枯病抗性鉴定方法，其特征在于：包括病田寻访、布局诱发诊查、补接与诱发建立成熟病圃、病害调查评价抗性4个步骤，具体包括：(A)病田寻访：明确往年植烟区烟草青枯病的发生与分布情况，选择交通便利的代表烟区，选取地势平坦、土壤质地和肥力均匀、排灌通畅、田块方正的发病地块作为病圃，并取土采用半选择性培养基分离病菌验证；(B)布局诱发诊查：布局，根据步骤(A)寻访获得病圃田块的大小、供试品种的多少设置3‑4个重复，田块四周以及重复间相隔的纵垄种植感病对照品种，每重复横垄种植供试品种，每20‑30个供试品种中设置1个感病对照或辅助感病对照，3‑4个重复叠加在一起、感病对照和辅助感病对照品种均匀地分布在横垄中，纵垄与横垄均为M型、植烟2行、行距70‑80cm、株距35‑45cm，相邻纵垄与横垄的间距与横垄的间距相同均为90‑100cm；植烟后，覆盖黑色地膜增温、地插式滴灌维持土壤水饱和保湿方式诱发病害，每10天观察田间均匀分布的感病对照或辅助感病对照品种青枯病的发生情况，当发现局部有青枯病初期症状时，病圃具备发病的条件，为零星发病病圃；(C)补接与诱发建立成熟病圃：根据步骤(B)布局种植烟株功能根的伸展幅度，调节切根铲与烟株的距离和插切根际土壤的深度，沿垄两端创伤根系，顺切根点定株浇灌6.0‑30.0×108cfu/mL的烟草青枯病菌悬浮液100‑200mL补接1次或补救接种1‑3次，接种后，覆盖或不覆盖黑色地膜、地插式滴灌维持土壤水饱和保湿诱发病害，每10天观察、调查田间均匀分布的感病对照或辅助感病对照青枯病发生情况，直至田间均匀分布的感病对照或辅助感病对照由条块状发生青枯病到发病均匀、发病率80％以上或直接由零星发病到发病均匀、发病率80％以上为止，即病圃从零星发病的病圃经过或不经过条块状病圃最终发展为发病均匀、发病率80％的成熟病圃；(D)病害调查评价抗性：发现步骤(C)建立的病圃成熟时的当天或次日及其后每10天，按病害严重度调查记录病情，每次调查完成后计算病情指数，当感病对照或辅助感病对照的病情指数不低于60时停止调查，以时间间隔与病情指数计算病害曲线下面积AUDPC和病程相对抗性指数RRICD，基于不同抗性水平的参照品种数值范围划定抗性水平。2.根据权利要求1所述的改进的全生育期人工病圃烟草品种青枯病抗性鉴定方法，其特征在于：所述步骤(A)的病田为单一病害的发病地块，即只发生烟草青枯病的田块、没有其他混发的根、茎基部病害；所述取土采用30‑40m2分割、五点取样、每点取500g深度为20cm耕作层土壤、混匀作为1个土壤样品；所述半选择性培养基配方为蛋白胨10g、甘油5mL、酪蛋白水解氨基酸1g、琼脂粉15g、蒸馏水1000mL，半选择性培养基121℃灭菌20min后，待降到50℃后再添加100μg/mL多粘菌素B、5μg/mL结晶紫、50μg/mL氯化三苯基四氮唑(TTC)、25μg/mL杆菌肽、0.5μg/mL青霉素、5μg/mL氯霉素和100μg/mL放线菌酮；所述分离病菌采用土壤稀释涂平板法进行。3.根据权利要求1所述的改进的全生育期人工病圃烟草品种青枯病抗性鉴