一种用于检测转基因调控元件的标准质粒及其构建方法与应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106480216A(43)申请公布日2017.03.08(21)申请号201611117850.5(22)申请日2016.12.07(71)申请人江苏省农业科学院地址210014江苏省南京市玄武区钟灵街50号(72)发明人邢宇俊陆丹丹吴季荣徐剑宏王园园史建荣(74)专利代理机构江苏圣典律师事务所32237代理人杨文晰孙忠浩(51)Int.Cl.C12Q1/68(2006.01)C12N15/63(2006.01)权利要求书1页说明书10页序列表7页附图4页(54)发明名称一种用于检测转基因调控元件的标准质粒及其构建方法与应用(57)摘要本发明提供了一种用于检测转基因农产品中调控元件的重组标准质粒分子，该重组标准质粒是利用重叠PCR技术将SEQIDNo.1所示的CaMV35S启动子、SEQIDNo.2所示的FMV35S启动子、SEQIDNo.3所示的Pat29、SEQIDNo.4所示的Ubiquitin、SEQIDNo.5所示的NOS启动子、SEQIDNo.6所示的T-35S终止子、SEQIDNo.7所示的NOS终止子和SEQIDNo.8所示的T-E9终止子基因依次连接获得融合片段，再利用分子克隆技术将所获得的融合片段克隆到载体pMD-19T中获得的；本发明提供的重组标准质粒可以替代转基因农产品筛查检测中的阳性标准物质，用于盲样转基因农产品定性PCR筛查检测，解决我国转基因农产品筛查中阳性标准物质不足等问题。CN106480216ACN106480216A权利要求书1/1页1.一种用于检测转基因调控元件的标准质粒，其核苷酸序列如SEQIDNo.9所示。2.如权利要求1所述用于检测转基因调控元件的标准质粒的构建方法，其特征在于，具体步骤如下：以重叠PCR技术将SEQIDNo.1所示的CaMV35S启动子基因、SEQIDNo.2所示的FMV35S启动子基因、SEQIDNo.3所示的Pat29基因、SEQIDNo.4所示的Ubiquitin基因、SEQIDNo.5所示的NOS启动子基因、SEQIDNo.6所示的T-35S终止子基因、SEQIDNo.7所示的NOS终止子基因和SEQIDNo.8所示的T-E9终止子基因片段依次连接获得融合片段，再将融合片段克隆到载体pMD-19中，即获得所述用于检测转基因调控元件的标准质粒。3.如权利要求1所述用于检测转基因调控元件的标准质粒在检测转基因农产品调控元件中的应用。4.一种包含如权利要求1所述用于检测转基因调控元件的标准质粒的试剂盒。5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括如下引物：CaMV35S启动子的特异性引物P-35S-F和P-35S-R，他们的核苷酸序列分别如SEQIDNO.10和SEQIDNO.11所示；或者，FMV35S启动子的特异性引物FMV35S-F和FMV35S-R，他们的核苷酸序列分别如SEQIDNO.12和SEQIDNO.13所示；或者，PTA29启动子的特异性引物PTA29-F和PTA29-R，他们的核苷酸序列分别如SEQIDNO.14和SEQIDNO.15所示；或者，Ubiquitin启动子的特异性引物Ubiquitin-F和Ubiquitin-R，他们的核苷酸序列分别如SEQIDNO.16和SEQIDNO.17所示；或者，NOS启动子的特异性引物PNOS-F和PNOS-R，他们的核苷酸序列分别如SEQIDNO.18和SEQIDNO.19所示；或者，T35S终止子T-35S的特异性引物T35S-F和T35S-R，他们的核苷酸序列分别如SEQIDNO.20和SEQIDNO.21所示；或者，NOS终止子T-NOS的特异性引物T-NOS-F和T-NOS-R，他们的核苷酸序列分别如SEQIDNO.22和SEQIDNO.23所示；或者，E9终止子T-E9的特异性引物T-E9-F和T-E9-R，他们的核苷酸序列分别如SEQIDNO.24和SEQIDNO.25所示。6.如权利要求5或6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒体积为25μL，其中包括：10×PCR缓冲液Mg2+2.5μL、200mmol的dNTPs、含量均为0.5mmol的特异性引物、1.25U的TaqDNA聚合酶以及浓度为25mg/L的所述用于检测转基因调控元件的标准质粒1.5μL，去离子水补足至25μL。2CN106480216A说明书1/10页一种用于检测转基因调控元件的标准质粒及其构建方法与应用技术领域[0001]本发明涉及生物技术领域，一种用于检测转基因调控元件的标准质粒及其构建方法与应用，以及包含该标准质粒的试剂盒。背景技术[0002]自从首例转基因产品被批准商业化生产以来，越来越多的转基因作物在不同的国家和地区