一种木二糖和木三糖的分离纯化方法及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109123172A(43)申请公布日2019.01.04(21)申请号201710501812.8C07H1/06(2006.01)(22)申请日2017.06.27(71)申请人华南农业大学地址510642广东省广州市天河区五山路483号(72)发明人左建军冯定远马岩余亲平高永峰叶慧曹庆云欧阳海燕(74)专利代理机构广州市华学知识产权代理有限公司44245代理人苏运贞裘晖(51)Int.Cl.A23K50/75(2016.01)A23K20/163(2016.01)C07H3/04(2006.01)C07H3/06(2006.01)权利要求书1页说明书9页序列表2页附图4页(54)发明名称一种木二糖和木三糖的分离纯化方法及其应用(57)摘要本发明公开了一种木二糖和木三糖的分离纯化方法及其应用，包括如下步骤：(1)通过Bio-GelP-2对低聚木糖进行粗分离，绘制粗分离洗脱曲线；(2)参照步骤(1)的粗分离洗脱曲线结果，通过Bio-GelP-2进行二次分离，得到二次分离后的木二糖、木三糖；(3)采用高效液相色谱法对所得的木二糖、木三糖进行纯度测定；最终得到的木二糖和木三糖纯度分别可达到97.05％和97.85％。同时，通过本发明的分离提纯方法所得到的木二糖和木三糖可显著提高鸡回肠和盲肠的乳酸杆菌菌群数量；木三糖显著降低鸡盲肠内大肠杆菌、沙门氏菌菌群数量，在改善鸡肠道健康方面具有良好的应用前景。CN109123172ACN109123172A权利要求书1/1页1.一种木二糖和木三糖的分离纯化方法，包括如下步骤：(1)通过聚丙烯酰胺凝胶Bio-GelP-2对低聚木糖进行粗分离，绘制粗分离洗脱曲线；(2)参照步骤(1)的粗分离洗脱曲线，粗分离得到的目标产物通过聚丙烯酰胺凝胶Bio-GelP-2进行二次分离，得到二次分离后的木二糖、木三糖；(3)采用高效液相色谱法对步骤(2)得到的木二糖、木三糖进行纯度测定。2.根据权利要求1所述的木二糖和木三糖的分离纯化方法，其特征在于，步骤(1)中所述的低聚木糖在粗分离前先进行预处理，所述的预处理的具体步骤为：将低聚木糖配制成低聚木糖溶液，离心取上清，调整pH为6～8。3.根据权利要求1所述的木二糖和木三糖的分离纯化方法，其特征在于，步骤(1)中所述的粗分离的具体操作步骤为：层析柱为60×2.5cmI.D.，层析介质为聚丙烯酰胺凝胶Bio-GelP-2，超纯水洗脱，洗脱速度为30～60mL/h，收集洗脱液。4.根据权利要求1所述的木二糖和木三糖的分离纯化方法，其特征在于：步骤(1)中所述的粗分离洗脱曲线通过测定洗脱液的还原糖浓度绘制得到。5.根据权利要求1所述的木二糖和木三糖的分离纯化方法，其特征在于，步骤(2)中所述的二次分离的具体操作步骤为：层析柱为100×1.2cmI.D.，层析介质为聚丙烯酰胺凝胶Bio-GelP-2，超纯水洗脱，洗脱速度为6～12mL/h。6.根据权利要求1所述的木二糖和木三糖的分离纯化方法，其特征在于，步骤(3)中所述的高效液相色谱法的分析条件为：色谱柱：Bio-RadAminexHPX-42A；流动相：高纯水；检测器温度：45～50℃；流速：0.3～0.6mL/min；进样量：15～20μL。7.权利要求1～6任一项所述的木二糖和木三糖的分离纯化方法在改善鸡肠道健康方面的应用。2CN109123172A说明书1/9页一种木二糖和木三糖的分离纯化方法及其应用技术领域[0001]本发明属于功能性低聚糖生产技术领域，特别涉及一种木二糖和木三糖的分离纯化方法及其应用。背景技术[0002]自抗生素被发现和使用以来，其作用功不可没，抗生素可通过抑制环境中的抗生因子产生的亚临床症状而防止动物腹泻，促进动物生长，但同时也可引起药物残留、细菌耐药性等负面问题，对动物、人和生态环境造成严重危害。然而，饲料中禁用抗生素后，动物生产性能显著下降，病死率显著升高，严重影响畜牧业的健康发展。因此，研发高安全、绿色的新型饲料抗生素替代产品已迫在眉睫。而益生素作为一种新型的抗生素替代品，具有无毒副作用、无耐药性、无残留、效果显著等诸多优点。它与抗生素不同的是，抗生素是微生物的代谢产物，能够抑制消化道内微生物的生长或将其杀死；而益生素是活的微生物或促进活菌增殖的寡糖等有机物，主要通过向消化道内导入对动物有益的活菌或功能性寡糖而使有益菌处于主导地位。低聚糖的发现则源于对益生素的扩展。低聚糖，或称寡糖，是由2～7个单糖通过糖苷键连接形成直链或支链的低聚合度糖类，它可分为功能性低聚糖和普通低聚糖两大类。普通低聚糖是指蔗糖、麦芽糖、乳糖等，它们可被机体消化系统消化吸收，不是肠道内有益菌的增殖因子。功能性低聚糖包括低聚木糖(XOS)