用于检测非洲猪瘟病毒的胶体金检测试纸条及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114113613A(43)申请公布日2022.03.01(21)申请号202111210054.7G01N33/558(2006.01)(22)申请日2021.10.18G01N33/58(2006.01)G01N33/543(2006.01)(83)生物保藏信息CCTCCNO：C20211732021.07.01(71)申请人山东绿都生物科技有限公司地址256600山东省滨州市滨城区经济开发区绿都生物工程高科技园(72)发明人于金枝武玉香刘捷于智慧谭静沈志强(74)专利代理机构北京知呱呱知识产权代理有限公司11577代理人杜立军(51)Int.Cl.G01N33/577(2006.01)G01N33/569(2006.01)权利要求书2页说明书7页附图3页(54)发明名称用于检测非洲猪瘟病毒的胶体金检测试纸条及其制备方法(57)摘要本发明公开了一种用于检测非洲猪瘟病毒的胶体金检测试纸条及其制备方法，所述检测试纸条包括所述试纸条包括底板、样品垫、结合垫、基膜和吸水纸，所述基膜覆盖于所述底板上，所述结合垫位于所述基膜的上样端，所述吸水纸位于所述基膜的吸附端，所述样品垫位于所述结合垫的上部；其中，所述结合垫上结合有胶体金标记的抗非洲猪瘟病毒蛋白p72多克隆抗体，所述基膜上分别设有检测线和质控线，所述检测线包被有抗非洲猪瘟病毒蛋白p72单克隆抗体，所述质控线包被有羊抗鼠IgG。本发明的非洲猪瘟病毒病原检测试纸条，可以快速、灵敏准确地检测样本，与PCR随机20份盲样符合率100％、操作简单、检测成本低，克服了国内检测非洲猪瘟病原主要依靠PCR检测的问题。CN114113613ACN114113613A权利要求书1/2页1.一种用于检测非洲猪瘟病毒的胶体金检测试纸条，其特征在于，所述检测试纸条包括所述试纸条包括底板、样品垫、结合垫、基膜和吸水纸，所述基膜覆盖于所述底板上，所述结合垫位于所述基膜的上样端，所述吸水纸位于所述基膜的吸附端，所述样品垫位于所述结合垫的上部；其中，所述结合垫上结合有胶体金标记的抗非洲猪瘟病毒蛋白p72多克隆抗体，所述基膜上分别设有检测线和质控线，所述检测线包被有抗非洲猪瘟病毒蛋白p72单克隆抗体，所述质控线包被有羊抗鼠IgG。2.如权利要求1所述的用于检测非洲猪瘟病毒的胶体金检测试纸条，其特征在于，所述抗非洲猪瘟病毒蛋白p72单克隆抗体的杂交瘤细胞株ASFV8G10于2021年07月01日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO:C2021173，保藏地址为：中国武汉‑武汉大学。3.如权利要求1所述的用于检测非洲猪瘟病毒的胶体金检测试纸条，其特征在于，所述基膜采用硝酸纤维素薄膜。4.如权利要求1所述的用于检测非洲猪瘟病毒的胶体金检测试纸条，其特征在于，所述胶体金颗粒紫外扫描最大吸收峰为523nm。5.一种制备权利要求1所述的用于检测非洲猪瘟病毒的胶体金检测试纸条的方法，其包括：所述方法包括：将胶体金标记的抗非洲猪瘟病毒蛋白p72多克隆抗体包被到结合垫上；在基膜的检测线上包被抗非洲猪瘟病毒蛋白p72的单克隆抗体，质控线上包被羊抗鼠IgG；所述基膜覆盖于所述底板上，所述结合垫置于所述基膜的上样端，所述吸水纸置于所述基膜的吸附端，所述样品垫置于所述结合垫的上部，得到所述检测试纸条。6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述结合垫的处理过程为：将结合垫在含有2％TritonX‑100、1％BSA、0.05％NaN3的pH7.40.02MPBS缓冲液中进行浸泡25‑35min后，烘干。7.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述样品垫的处理过程为：将样品垫浸泡于含有0.1％TritonX‑100、1％丙氨酸、0.05％NaN3的pH7.40.01MPBS缓冲液中5‑15min，烘干。8.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述检测线上抗非洲猪瘟病毒蛋白p72单克隆抗体的包被浓度为0.5mg/mL。9.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述胶体金的制备方法为：取99mL的超纯水装入250mL的圆底烧瓶，放入搅拌子，置于磁力搅拌器上，加入1％氯金酸溶液1mL，加热搅拌，待溶液沸腾后，加入1.6mL1％柠檬酸三钠溶液，氯金酸溶液由灰色逐渐变为酒红色，颜色稳定后继续加热10min，待溶液冷却后，用微孔滤膜过滤，得到所述胶体金溶液。10.如权利要求5所述的方法，其特征在于，用0.1mol/L的K2CO3调节胶体金pH值为9.0，按照每1mL胶体金溶液加入6μg抗非洲猪瘟病毒蛋白p72多克隆抗体，室温下120rpm摇30min；2CN114113613A权利要求书2/2页加入10％牛血清白蛋白20μL，室温下120rpm摇30min，12