一种利用温度诱导双水相体系分离纯化绿原酸的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利(10)授权公告号(10)授权公告号CNCN103420838103420838B(45)授权公告日2014.12.03(21)申请号201310339674.X审查员吴相国(22)申请日2013.08.06(73)专利权人北京联合大学生物化学工程学院地址100023北京市朝阳区垡头西里三区18号(72)发明人霍清薛明德杨晓芳(74)专利代理机构北京北新智诚知识产权代理有限公司11100代理人刘秀青(51)Int.Cl.C07C69/732(2006.01)C07C67/48(2006.01)C07C67/56(2006.01)权利要求书1页权利要求书1页说明书5页说明书5页(54)发明名称一种利用温度诱导双水相体系分离纯化绿原酸的方法(57)摘要一种利用温度诱导双水相体系分离纯化绿原酸的方法，包括以下步骤：(1)将杜仲叶粉碎后放入提取罐中，向其中加入5～7倍重量的水，加热回流1.5～2h，浓缩至浸膏，即为绿原酸粗品；(2)将EOPO和水按体积比1～3∶1～4混合，然后向其中加入盐，混合均匀，向溶液中加入绿原酸粗品，混合均匀后，离心分离水相和富含EOPO的有机相，绿原酸在有机相富集，杂质在水相富集；(3)将步骤(2)得到的有机相在50～70℃水浴10～30min，溶液自动分成两相，离心分离有机相和水相，绿原酸在水相富集，EOPO在有机相富集并得以回收；(4)将得到的水相冷却至室温，放置过夜，析出结晶，过滤得到绿原酸纯品。该方法工艺简单，耗时短，降低物耗，利于工业中试放大，且收率较高。CN103420838BCN103428BCN103420838B权利要求书1/1页1.一种利用温度诱导双水相体系分离纯化绿原酸的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)提取绿原酸粗品：将杜仲叶粉碎后放入提取罐中，向其中加入5～7倍重量的水，加热回流1.5～2h，过滤，滤液浓缩至浸膏，即为绿原酸粗品；(2)双水相分离：将环氧乙烷-环氧丙烷共聚物和水按体积比1～3:1～4混合，然后向其中加入盐，所述的盐为磷酸氢二钾、磷酸二氢钾或无水硫酸钠；混合均匀，所得溶液中盐的浓度为0.05～0.15g/mL，向溶液中按2.0～5.0mg/mL的量加入绿原酸粗品，混合均匀后，以转速为1000～2000r/min离心分离3～5min，分离水相和富含环氧乙烷-环氧丙烷共聚物的有机相，绿原酸在有机相富集，杂质在水相富集；(3)温度诱导双水相分离：将步骤(2)得到的有机相在50～70℃水浴10～30min，溶液自动分成两相，以转速为1000～2000r/min离心分离3～5min，分离有机相和水相，绿原酸在水相富集，环氧乙烷-环氧丙烷共聚物在有机相富集并得以回收；(4)浓缩干燥：将步骤(3)得到的水相冷却至室温，放置过夜，析出结晶，过滤得到绿原酸纯品。2.根据权利要求1所述的利用温度诱导双水相体系分离纯化绿原酸的方法，其特征在于，所述步骤(2)中的环氧乙烷-环氧丙烷共聚物的平均分子量为2000～2870。3.根据权利要求1所述的利用温度诱导双水相体系分离纯化绿原酸的方法，其特征在于，所述步骤(2)中环氧乙烷-环氧丙烷共聚物与水的体积比为1：1、1：2、1：3、1：4、2：3、3：2或3：4。4.根据权利要求1所述的利用温度诱导双水相体系分离纯化绿原酸的方法，其特征在于，所述步骤(3)的水浴温度为60℃。2CN103420838B说明书1/5页一种利用温度诱导双水相体系分离纯化绿原酸的方法技术领域[0001]本发明涉及一种利用温度诱导双水相体系分离纯化绿原酸的方法，属于生物化工技术领域。背景技术[0002]绿原酸，是由咖啡酸与奎尼酸生成的缩酚酸，是苯丙素类化合物。在植物金银花、杜仲中含量较高，易溶解于水、乙醇、丙酮等有机溶剂中，传统提取方法用异戊醇法，利用其酸性提取。由于绿原酸为咖啡酸与奎宁酸形成的脂，用酸碱萃取时易水解，产率不高。[0003]专利文献CN101781211A公开了一种葵花粕中绿原酸提取方法，该方法将葵花粕粉碎，加入浓度为1％的纤维素酶和浓度为5％的蛋白酶，纤维素酶与蛋白酶酶液比为4∶1，葵花粕与两种酶液比为1∶8，调pH值为4，酶解时间为1.2h，酶解温度为49℃；再用pH值为3～6的45％～55％乙醇溶液浸提，使葵花粕中的绿原酸充分溶解在浸提液中，并冷却至室温；然后，再用大孔树脂法常规处理，经吸附、洗脱、干燥等工艺制得绿原酸，绿原酸得率可达到1.91％。[0004]专利文献CN101781211A公开了一种从中药杜仲叶中制备总黄酮、绿原酸提取工艺，采用碱性蛋白酶-复合风味酶双酶酶解、膜分离和喷雾干燥技术得到绿原酸产品。专利文献CN102476996A公开了一种金银花中绿原酸的提取工艺，利用乙醇回流法