一种利用双水相体系分离纯化α-淀粉酶抑制剂的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114249804A(43)申请公布日2022.03.29(21)申请号202111483376.9(22)申请日2021.12.07(71)申请人南京市第一医院地址210006江苏省南京市秦淮区长乐路68号申请人南京同凯兆业生物技术有限责任公司(72)发明人施良陈晓春张磊汤亦文(74)专利代理机构江苏圣典律师事务所32237代理人仲凌霞肖明芳(51)Int.Cl.C07K14/415(2006.01)C07K1/34(2006.01)C07K1/14(2006.01)权利要求书1页说明书5页(54)发明名称一种利用双水相体系分离纯化α-淀粉酶抑制剂的方法(57)摘要本发明涉及生物领域，具体公开了一种利用双水相体系分离纯化α‑淀粉酶抑制剂的方法，利用含有聚乙二醇和谷氨酸钠的双水相混合体系，从含α‑淀粉酶抑制剂的物料中分离纯化α‑淀粉酶抑制剂。本发明方法能够高效的分离纯化α‑淀粉酶抑制剂，α‑淀粉酶抑制剂的活力达到2840U/g。本发明将膜分离和喷雾干燥等其它生物分离技术集成，缩短操作周期，提高产品的收率，为α‑淀粉酶抑制剂的产业化打下了基础。CN114249804ACN114249804A权利要求书1/1页1.一种利用双水相体系分离纯化α‑淀粉酶抑制剂的方法，其特征在于，利用含有聚乙二醇和谷氨酸钠的双水相混合体系，从含α‑淀粉酶抑制剂的物料中分离纯化α‑淀粉酶抑制剂。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述聚乙二醇数均分子量为2000～6000。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述双水相混合体系中，所述聚乙二醇、谷氨酸钠和水的质量比为(15～35):(20～40):(35～50)。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述含α‑淀粉酶抑制剂的物料为以芸豆为原料制备的含α‑淀粉酶抑制剂的粗提液。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述以芸豆为原料制备的含α‑淀粉酶抑制剂的粗提液的制备方法为将芸豆粉碎后，碱水提取，离心，灭酶，超滤，即得以芸豆为原料制备的含α‑淀粉酶抑制剂的粗提液。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述双水相混合体系与含α‑淀粉酶抑制剂的物料的质量比为(0.5‑2):1。7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，将含有聚乙二醇和谷氨酸钠的双水相混合体系与含α‑淀粉酶抑制剂的物料混合，静置，收集上层聚乙二醇相；将上层聚乙二醇相稀释后，超滤膜浓缩，所得截留物即为α‑淀粉酶抑制剂。8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述静置的温度为20～30℃。9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述静置的时间为10～20min。10.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述超滤膜的截留分子量为15～25KDa。2CN114249804A说明书1/5页一种利用双水相体系分离纯化α‑淀粉酶抑制剂的方法技术领域[0001]本发明涉及生物领域，具体涉及一种利用双水相体系分离纯化α‑淀粉酶抑制剂的方法。背景技术[0002]α‑淀粉酶抑制剂是一种糖苷水解酶抑制剂，在胃肠道中，它能抑制肠胃道内唾液和胰淀粉酶的活性，阻碍或延缓其对食物中主要的碳水化合物淀粉的消化作用，降低食物中淀粉糖类物质的分解吸收，从而起到减低血糖、血脂的作用，抑制血糖浓度的升高。对于肥胖患者，α‑淀粉酶抑制剂可减少糖向脂肪转化，延缓肠道的排空，增加脂肪消耗以减少体重。因此，α‑淀粉酶抑制剂能够防止和治疗肥胖症、脂肪过多症、动脉硬化症、高血脂及糖尿病等。同时，α‑淀粉酶抑制剂可以阻碍或延缓其对食物中主要的碳水化合物淀粉的消化作用，阻止血糖的升高，从而能使糖尿病人吃饱饭，消除饥饿感。这种可以同时达到控制血糖升高和防治肥胖的蛋白质类生物制品在当今社会有很大的科研价值和应用前景。[0003]白芸豆α‑淀粉酶抑制剂是一种能特异性抑制人体唾液和肠道淀粉酶活力的糖蛋白，能够通过阻碍或延缓淀粉的水解来降低餐后血糖高峰，因而在糖尿病的预防和控制方面有着较好的应用前景。白芸豆是一种短日照植物，春秋两季均可栽培，在我国各省区均有种植，尤其在云南、四川、贵州等省份种植面积较大，一般产量在1020～1125kg/hm2。因此白芸豆α‑淀粉酶抑制剂产品的工业化制备有着重大的现实意义和良好的物质基础。[0004]目前国外主要采用盐析、离子交换纤维素层析或凝胶层析等分离方法来纯化α‑淀粉酶抑制剂，从小麦粉中提取α‑淀粉酶抑制剂，比活力可以提高到4.08倍，但活性回收率仅为9.8％；从豆类中提取时活性回收率也只有37％。上述提取方法成本很高，操作周期长，不利于进行工业化放大应用。双水相体系是指某些有机物之间或有机物与无机盐之间，在水中以适当的浓度溶解后形成互不相溶的两相或多相体系，双水相体