一种利用双水相萃取分离纯化裂褶菌多糖的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108676107A(43)申请公布日2018.10.19(21)申请号201810567794.8(22)申请日2018.06.05(71)申请人广东药科大学地址510000广东省广州市海珠区宝岗光汉直街40号(72)发明人周林余菁菁吴继宏朱爽黄嘉欣(74)专利代理机构广州胜沃园专利代理有限公司44416代理人黄健仪(51)Int.Cl.C08B37/02(2006.01)权利要求书1页说明书4页附图4页(54)发明名称一种利用双水相萃取分离纯化裂褶菌多糖的方法(57)摘要本发明涉及裂褶菌多糖提取技术领域，公开了一种利用双水相萃取分离纯化裂褶菌多糖的方法，其包括裂褶菌发酵液的制备和利用碳酸钠/乙醇双水相萃取体系进行萃取步骤。经该方法提取的裂褶菌多糖结构完整，多糖收率高，蛋白去除率高，且操作简便，低毒安全，易于工业规模制备。CN108676107ACN108676107A权利要求书1/1页1.一种利用双水相萃取分离纯化裂褶菌多糖的方法，其特征在于：包括以下步骤：S1、裂褶菌发酵液的制备；S2、萃取分离：向步骤S1制备的裂褶菌发酵液加入碳酸钠/乙醇双水相萃取体系，电动搅拌混匀后静置分层、离心、分离出下相，超滤浓缩、减压蒸馏、真空干燥，即得裂褶菌多糖。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤S2中碳酸钠/乙醇双水相萃取体系建立过程为：称取碳酸钠，加入水，溶解结束后加入无水乙醇，充分混匀，建立双水相体系。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述双水相体系中碳酸钠的质量分数为10％～20％，无水乙醇的质量分数为15％～25％。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述双水相体系中碳酸钠的质量分数为20％，无水乙醇的质量分数为25％。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤S2中裂褶菌发酵液与碳酸钠/乙醇双水相萃取体系的用量比为1:(1～10)。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述裂褶菌发酵液与碳酸钠/乙醇双水相萃取体系的用量比为1:5。7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤S2中萃取温度为25～37℃；所述步骤S2中电动搅拌机搅拌时间为1～10min，搅拌机转速为200rpm。8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤S2中静置分层时间为10～30min。9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤S2中离心时间为3～10min，转速为3000～5000rpm。10.根据权利要求1～9任一所述的方法制备得到的裂褶菌多糖。2CN108676107A说明书1/4页一种利用双水相萃取分离纯化裂褶菌多糖的方法技术领域[0001]本发明涉及分离纯化技术领域，具体涉及一种利用双水相萃取分离纯化裂褶菌多糖的方法。背景技术[0002]裂褶菌又名白参、树花、鸡冠菌、鸡毛菌子等，是一种具有较高营养和药用价值的大型真菌。裂褶菌多糖(SPG)是从裂褶菌子实体、菌丝体或发酵液中提取出来的水溶性多糖，主链为β-(1→3)D葡聚糖结构，具有β-(1→6)糖苷侧链。SPG具有抑制肿瘤、抗菌消炎、抗辐射、提高机体免疫力等多种生理活性。SPG在水溶液中的天然构象具有三螺旋结构，若三螺旋结构遭到破坏，将影响其抗肿瘤活性。[0003]裂褶多糖常规的提取方法包括热水提取、稀碱提取、酶法提取等，存在提取率相对偏低、可能引起多糖链的断裂，特别是影响和多糖生物活性直接相关的三螺旋结构等缺点。超声提取、微波提取、闪式提取等工艺，与传统方法相比较具有一定的优势，但设备、能耗等综合成本较高。[0004]双水相萃取技术在生物化工领域广受关注，它是利用溶质在两相之间分配系数的差异而进行分离的技术，具备操作简单、易于放大等优点，但采用双水相体系萃取提取裂褶菌多糖的方法尚未见报道。发明内容[0005]本发明针对现有技术的缺陷，公开采用了双水相萃取技术作为裂褶菌多糖的提取方法，选择了合适的双水相系统，提供了一种采用双水相萃取提取发酵液中裂褶菌多糖的方法。[0006]本发明所述技术问题由以下技术方案实现：一种利用双水相萃取分离纯化裂褶菌多糖的方法，所述提取方法具体步骤如下：[0007]S1、裂褶菌发酵液的制备；[0008]S2、萃取分离：向步骤S1制备的裂褶菌发酵液加入碳酸钠/乙醇双水相萃取体系，电动搅拌混匀后静置分层、离心、分离出下相，超滤浓缩、减压蒸馏、真空干燥，即得裂褶菌多糖。[0009]进一步地，所述步骤S2中碳酸钠/乙醇双水相萃取体系建立过程为：所述步骤S2中碳酸钠/乙醇双水相萃取体系建立过程为：称取碳酸钠，加入水，溶解结束后加入无水乙醇，充分混匀，建立双水相体系。[0010]进一步地，所述双水相体系中碳酸钠的质量分数为10％～20％，无水乙醇的质