具有葡糖淀粉酶活性的多肽及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CNCN104011067104011067A(43)申请公布日2014.08.27(21)申请号201280063536.7代理人邹雪梅李炳爱(22)申请日2012.12.20(51)Int.Cl.C07K14/37(2006.01)(30)优先权数据12151285.92012.01.16EPC12N9/26(2006.01)61/5794292011.12.22US(85)PCT国际申请进入国家阶段日2014.06.20(86)PCT国际申请的申请数据PCT/EP2012/0763522012.12.20(87)PCT国际申请的公布数据WO2013/092840EN2013.06.27(71)申请人杜邦营养生物科学有限公司地址丹麦哥本哈根(72)发明人J.F.克拉梅N.M.菲什P.E.德格恩I.尼科拉伊P.克鲁伊托夫P.范索林根S.范斯蒂格特坦恩斯S.布雷内曼J.K.舍蒂S.H.李(74)专利代理机构中国专利代理(香港)有限公权利要求书5页权利要求书5页说明书53页说明书53页司72001序列表18页序列表18页附图14页附图14页(54)发明名称具有葡糖淀粉酶活性的多肽及其制备方法(57)摘要本发明涉及具有葡糖淀粉酶活性且具有改善的特性的多肽，和涉及包含适用于生产食品、饮料(例如啤酒)、饲料或者生物燃料的这些多肽的组合物。还描述了适用于大规模蛋白质纯化程序的用于分离葡糖淀粉酶的改进和成本效益好的方法。此外，公开了例如在酿造工艺中与根据本发明的葡糖淀粉酶有关的不同方法和用途。CN104011067ACN10467ACN104011067A权利要求书1/5页1.一种具有葡糖淀粉酶活性的分离的多肽，所述多肽选自：a)包含氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列与选自SEQIDNO：3和6的成熟多肽的氨基酸序列具有至少75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性；b)由以下编码的多肽：i)在SEQIDNO：1或SEQIDNO：4中包含的核酸序列、或ii)i)的cDNA序列、或iii)SEQIDNO：2或SEQIDNO：5的序列、或iv)在至少低严格性条件下与i)、ii)、或iii)的互补链杂交的多核苷酸；c)包含氨基酸序列中的一种或多种氨基酸的保守取代、缺失和/或插入的多肽，所述氨基酸序列选自SEQIDNO：3和6的成熟多肽；d)由多核苷酸编码的多肽，所述多核苷酸包含的核苷酸序列与SEQIDNO：3或6的成熟多肽编码序列具有至少75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性；和e)a)、b)、c)或d)的多肽的具有葡糖淀粉酶活性的片段。2.一种具有葡糖淀粉酶活性的分离的多肽，所述多肽包含的氨基酸序列与选自SEQIDNO：3和6的成熟多肽的氨基酸序列具有至少75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。3.一种具有葡糖淀粉酶活性的分离的多肽，所述多肽由以下编码：i)在SEQIDNO：1或SEQIDNO：4中包含的核酸序列、或ii)i)的cDNA序列、或iii)SEQIDNO：2或SEQIDNO：5的序列、或iv)在至少低严格性条件下与i)、ii)、或iii)的互补链杂交的多核苷酸。4.一种具有葡糖淀粉酶活性的分离的多肽，所述多肽包含选自SEQIDNO：3和6的成熟多肽的氨基酸序列中的一种或多种氨基酸的保守取代、缺失和/或插入。5.一种具有葡糖淀粉酶活性的分离的多肽，所述多肽由包含与SEQIDNO：3或6的成熟多肽编码序列具有至少75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的核苷酸序列的多核苷酸编码。6.一种具有葡糖淀粉酶活性的分离的多肽，所述多肽为根据权利要求1-5中任一项所述的多肽的片段。7.根据权利要求1-6中任一项所述的多肽，其中所述氨基酸序列包含选自以下组的至少一种或多种氨基酸残基：a)选自与SEQIDNO：3或6中的第459位对应的位置处的A和P的氨基酸残基，b)选自与SEQIDNO：3或6中的第473位对应的位置处的C和S的氨基酸残基，c)选自与SEQIDNO：3或6中的第474位对应的位置处的A和R的氨基酸残基，d)选自与SEQIDNO：3或6中的第475位对应的位置处的A和P的氨基酸残基，e)选自与SEQID