一种猪圆环病毒Ⅱ型灭活疫苗组合物及制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105833262A(43)申请公布日2016.08.10(21)申请号201610236244.9(22)申请日2016.04.15(71)申请人山东畜牧兽医职业学院地址261061山东省潍坊市高新区胜利东街88号(72)发明人郭洪梅李舫王成森王中杰苏丹(74)专利代理机构北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙)11350代理人汤东凤(51)Int.Cl.A61K39/12(2006.01)A61K39/39(2006.01)A61P31/20(2006.01)权利要求书1页说明书6页序列表2页附图3页(54)发明名称一种猪圆环病毒Ⅱ型灭活疫苗组合物及制备方法(57)摘要本发明提出了一种猪圆环病毒Ⅱ型灭活疫苗组合物及制备方法，解决了现有技术中猪圆环病毒2型疫苗成本高、效力低的问题，一种猪圆环病毒Ⅱ型灭活疫苗组合物，所述组合物由以下组分组成：猪圆环病毒Ⅱ型灭活病毒液、中草药佐剂、化学类佐剂，其中所述中草药佐剂由人参、杜仲叶、当归多糖，所述化学类佐剂为白油、吐温20、司盘80、硬质酸铝，所述猪圆环病毒Ⅱ型毒株灭活病毒液与所述中草药佐剂的质量比为1:2～2:1，本发明提出了制备疫苗的方法，将发挥免疫作用的中草药佐剂与猪圆环病毒Ⅱ型灭活病毒液混合均匀，使得疫苗的效力更高，成本低，抗原物质混合佐剂注入机体后，改变了抗原的物理性质，可使抗原物质缓慢的释放，延长了抗原的作用时间。CN105833262ACN105833262A权利要求书1/1页1.一种猪圆环病毒Ⅱ型灭活疫苗组合物，其特征在于，所述组合物由以下组分组成：猪圆环病毒Ⅱ型灭活病毒液、中草药佐剂、化学类佐剂，其中所述中草药佐剂由黄芪多糖、人参、杜仲叶、当归多糖组成，所述化学类佐剂为白油、吐温20、司盘80、硬质酸铝，所述猪圆环病毒Ⅱ型毒株灭活病毒液与所述中草药佐剂的质量比为1:2～2:1。2.如权利要求1所述的一种猪圆环病毒Ⅱ型灭活疫苗组合物，其特征在于，所述组合物包含以下重量份的原料：20～25份黄芪多糖、10～15份人参、3～6份杜仲叶、20～30份当归多糖、30～50份猪圆环病毒Ⅱ型灭活病毒液、18～24份白油、12～15份吐温20、6～10份司盘80、4～7份硬质酸铝。3.如权利要求2所述的一种猪圆环病毒Ⅱ型灭活疫苗组合物，其特征在于：所述猪圆环病毒Ⅱ型灭活病毒液的毒价为105.5TCID50/mL。4.制备如权利要求1至3中任一项所述的一种猪圆环病毒Ⅱ型灭活疫苗组合物的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将中草药佐剂的活性成分进行提取，后用生理盐水溶解，过滤后制成待用液；2)制备猪圆环病毒Ⅱ型灭活病毒液，将所述猪圆环病毒Ⅱ型灭活病毒液加至所述待用液中，搅拌均匀；3)向白油中添加司盘80和硬质酸铝制成油相混合物，将作为水相的吐温20与所述油相混合物混匀，得混合液；4)将步骤2)中的产物加入到所述混合液中，离心乳化3min，即得成品。5.如权利要求4所述的一种猪圆环病毒Ⅱ型灭活疫苗组合物的制备方法，其特征在于，步骤2)中制备猪圆环病毒Ⅱ型灭活病毒液的过程中包括设计三对引物用于扩增猪圆环病毒Ⅱ型毒株的全基因序列，所述三对引物分别是：PCV2-F1的基因序列为5'-TGCAGAAGCGTGATTGGAAGAC-3'，PCV2-R1的基因序列为5'-CCGCACCTTCGGATATACTATC-3'；PCV2-F2的基因序列为5'-AGGGCCAGAATTCAACCTTT-3'，PCV2-R2的基因序列为5'-TCCCACAGAGTCTCAGTAGA-3'；PCV2-F3的基因序列为5'-AGGGCCAGAATTCAACCTTAACCTTC-3'，PCV2-R3的基因序列为5'-GTTGAATTCTGGCCCTGCTCCCCGAT-3'。2CN105833262A说明书1/6页一种猪圆环病毒Ⅱ型灭活疫苗组合物及制备方法技术领域[0001]本发明涉及猪用疫苗领域，特别是指一种猪圆环病毒Ⅱ型灭活疫苗组合物及制备方法。背景技术[0002]猪圆环病毒2型(PCV2)是引起猪断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原。自1991年在加拿大猪群中暴发以来，PMWS给全世界养猪业造成了巨大的经济损失。PCV2还与增生性坏死性肺炎、母猪繁殖障碍、猪皮炎与肾病综合征和猪呼吸道疾病综合征相关。据估计，PCV2相关性疾病(PCVD)，主要是PMWS，在2014年给欧洲造成的损失高达6亿欧元，PCVD同样给我国养猪业造成了严重的经济损失。[0003]目前，传统的PCV2疫苗通常由灭活或被杀死或经修饰的活致病微生物的粗制备物组成，向疫苗中加入较小剂量的佐剂，来刺激类似的免疫应答，从而减少疫苗的制造成本。因此，当将疫苗与佐剂组合时