苍白杆菌介导的植物转化.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108513584A(43)申请公布日2018.09.07(21)申请号201680051469.5(72)发明人A.阿南德S.H.巴斯S.M.伯泰恩H(22)申请日2016.08.26-J.乔A.J.金尼T.M.克莱恩M.拉斯纳K.E.麦布里德Y.莫伊(30)优先权数据B.A.M.罗森卫俊智62/2112672015.08.28US(74)专利代理机构中国专利代理(香港)有限公(85)PCT国际申请进入国家阶段日司720012018.02.28代理人翟建伟黄希贵(86)PCT国际申请的申请数据(51)Int.Cl.PCT/US2016/0491352016.08.26C12N15/82(2006.01)(87)PCT国际申请的公布数据C07K14/195(2006.01)WO2017/040343EN2017.03.09(83)生物保藏信息NRRLB-670782015.07.10(71)申请人先锋国际良种公司地址美国依阿华州申请人纳幕尔杜邦公司权利要求书19页说明书71页附图12页(54)发明名称苍白杆菌介导的植物转化(57)摘要本发明提供了用于苍白杆菌介导的植物转化的方法和组合物。这些方法包括但不限于使用苍白杆菌菌株将目的多核苷酸转移至植物细胞中。这些方法包括VirD2-依赖性方法。这些组合物包含苍白杆菌菌株、转移DNA、构建体和/或质粒。这些组合物包含具有包含一个或多个毒力基因、边界区和/或复制起点的质粒的苍白杆菌菌株。本发明还提供了由这些方法产生的包含目的多核苷酸的植物细胞、组织、植物和种子。CN108513584ACN108513584A权利要求书1/19页1.一种分离的海沃德苍白杆菌(Ochrobactrumhaywardense)H1，其中所述苍白杆菌(Ochrobactrum)被保藏在NRRLB-67078下。2.海沃德苍白杆菌H1，其包含载体，所述载体包含处于有效连接的：a.第一核酸，其包含vir基因区域，其中所述vir基因区域发挥作用以VirD2依赖性方式将编码目的序列的核酸引入植物细胞中；和b.第二核酸，其包含与目的序列有效地连接的一个或多个T-DNA边界序列。3.如权利要求2所述的苍白杆菌，其中所述第一核酸和所述第二核酸在单个多核苷酸分子上。4.如权利要求2所述的苍白杆菌，其中所述第一核酸和所述第二核酸在分离的多核苷酸分子上。5.如权利要求2-4中任一项所述的苍白杆菌，其还包含选择性标记基因。6.如权利要求5所述的苍白杆菌，其中所述选择性标记基因提供对庆大霉素、新霉素/卡那霉素、潮霉素或壮观霉素的抗性。7.如权利要求5-6中任一项所述的苍白杆菌，其中所述选择性标记基因是aacC1基因、npt1基因、npt2基因、hpt基因、SpcN基因、aph基因或aadA基因。8.如权利要求5-7中任一项所述的苍白杆菌，其中所述选择性标记基因是aacC1基因。9.如权利要求5-8中任一项所述的苍白杆菌，其中所述aacC1基因具有SEQIDNO：1、或其变体和片段。10.如权利要求5-9中任一项所述的苍白杆菌，其中所述选择性标记基因是aadA基因。11.如权利要求5-10中任一项所述的苍白杆菌，其中所述aadA基因具有SEQIDNO：39、或其变体和片段。12.如权利要求5-11中任一项所述的苍白杆菌，其中所述选择性标记基因是npt1基因。13.如权利要求5-12中任一项所述的苍白杆菌，其中所述npt1基因具有SEQIDNO：40、或其变体和片段。14.如权利要求5-13中任一项所述的苍白杆菌，其中所述选择性标记基因是npt2基因。15.如权利要求5-14中任一项所述的苍白杆菌，其中所述npt2基因具有SEQIDNO：41、或其变体和片段。16.如权利要求5-15中任一项所述的苍白杆菌，其中所述选择性标记基因是hpt基因。17.如权利要求5-16中任一项所述的苍白杆菌，其中所述hpt基因具有SEQIDNO：67、或其变体和片段。18.如权利要求5-17中任一项所述的苍白杆菌，其中所述选择性标记基因不是四环素选择性标记基因。19.如权利要求5-18中任一项所述的苍白杆菌，其中所述选择性标记基因不是tetAR基因。20.如权利要求5-19中任一项所述的苍白杆菌，其中所述选择性标记基因是反向选择性标记基因。21.如权利要求20所述的苍白杆菌，其中所述反向选择性标记基因是sacB基因、rpsL(strA)基因、pheS基因、dhfr(folA)基因、lacY基因、Gata-1基因、ccdB基因、或thyA-基因。22.如权利要求2-21中任一项所述的苍白杆菌，其中所述vir基因区域包含分别具有2CN108513584A权利要求书2/19页SEQID