一种人脐带、羊膜和胎盘样本的通用保存液及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112471138A(43)申请公布日2021.03.12(21)申请号202011438054.8(22)申请日2020.12.10(71)申请人杜德（江门）生物科技有限公司地址529000广东省江门市江海区南山路333号产业加速园21幢(2#综合配套用房)首层和二层自编202室(信息申报制)(72)发明人张玲洁吴基伟郑婕(74)专利代理机构北京集佳知识产权代理有限公司11227代理人苏云辉(51)Int.Cl.A01N1/02(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图1页(54)发明名称一种人脐带、羊膜和胎盘样本的通用保存液及其制备方法(57)摘要本发明属于干细胞技术领域，尤其涉及一种人脐带、羊膜和胎盘样本的通用保存液及其制备方法。本申请的通用保存液中，DMEM基础培养基为样本的间充质干细胞提供最基础的营养；胰岛素能促进样本间充质干细胞对通用保存液中的糖分进行吸收和利用，维持细胞活性；人血白蛋白为间充质干细胞提供动态平衡，维持细胞渗透压；维生素C能防止长时间的氧化产生的自由基对间充质干细胞造成损伤；EGF能促进间充质干细胞增殖，维持细胞原有形态。实验结果表明，本保存液可用于长时间保存脐带、羊膜和胎盘，获取的间充质干细胞数量多、活率高，且人血白蛋白、胰岛素、维生素C和EGF在提高保存脐带中间充质干细胞数和间充质干细胞活率具有协同作用。CN112471138ACN112471138A权利要求书1/1页1.一种人脐带、羊膜和胎盘样本的通用保存液，其特征在于，所述通用保存液由DMEM基础培养基、胰岛素、人血白蛋白、维生素C、EGF、青霉素、链霉素和肝素钠组成；所述通用保存液的pH值为7.5～7.8。2.根据权利要求1所述的通用保存液，其特征在于，所述胰岛素在所述通用保存液中的浓度为10‑20mg/L；所述人血白蛋白在所述通用保存液中的浓度为10‑15g/L；所述维生素C在所述通用保存液中的浓度为100‑200mg/L；所述EGF在所述通用保存液中的浓度为10‑50μg/L。3.根据权利要求2所述的通用保存液，其特征在于，所述胰岛素在所述通用保存液中的浓度为10mg/L；所述人血白蛋白在所述通用保存液中的浓度为10g/L；所述维生素C在所述通用保存液中的浓度为100mg/L；所述EGF在所述通用保存液中的浓度为10μg/L。4.根据权利要求1所述的通用保存液，其特征在于，所述青霉素在所述通用保存液中的浓度为50000‑100000U/L；所述链霉素在所述通用保存液中的浓度为50‑100mg/L；所述肝素钠在所述通用保存液中的浓度为6250‑12500U/L。5.根据权利要求4所述的通用保存液，其特征在于，所述青霉素在所述通用保存液中的浓度为100000U/L；所述链霉素在所述通用保存液中的浓度为100mg/L；所述肝素钠在所述通用保存液中的浓度为6250U/L。6.权利要求1至5任意一项所述人脐带、羊膜和胎盘样本的通用保存液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：在DMEM基础培养基中加入人血白蛋白和肝素钠，再依次分别加入青霉素、链霉素、胰岛素、维生素C和EGF，然后采用滤膜过滤，得到所述通用保存液。7.一种保存样本的方法，其特征在于，包括以下步骤：采用权利要求1至5任意一项所述通用保存液对样本进行保存；所述样本为人脐带、羊膜和/或胎盘。8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述样本的目的细胞为间充质干细胞。9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述保存的时间为72h以下。2CN112471138A说明书1/5页一种人脐带、羊膜和胎盘样本的通用保存液及其制备方法技术领域[0001]本发明属于干细胞技术领域，尤其涉及一种人脐带、羊膜和胎盘样本的通用保存液及其制备方法。背景技术[0002]间充质干细胞是一类具有自我更新和多向分化潜能的细胞，又称多潜能基质细胞，简称MSCs，是属于中胚层的一类多能干细胞，主要存在于结缔组织和器官间质中，包括：骨髓、脐带、脂肪、羊膜、牙髓、胎盘等。在适宜条件下可分化为脂肪、骨、软骨等多种组织细胞。与骨髓来源的MSC相比，脐带、羊膜和胎盘来源的间充质干细胞因其取材方便，无道德伦理争议，可获取的细胞数量多、增殖能力强、免疫调节作用大，分泌细胞生长因子的总量也非常高，便于扩增和传代，同时又没有配型、排异等问题，极其适合用于临床研究和应用，是间充质干细胞的理想来源。[0003]但是，间充质干细胞需要通过样本在GMP实验室中制备分离、高效提纯和快速扩增后，才能产出符合标准的细胞。所以，样本的安全保存就成为了间充质干细胞产出的基本要求。而样本从医院产房到GMP实验室，少则需要数小时，多则需要数天，这其中样本会受到诸如时间、温度、营养