两个杜松烷型和一个桉烷型倍半萜的制备方法及其在协同氟康唑抗耐药真菌中的应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112811998A(43)申请公布日2021.05.18(21)申请号202110067047.XC07C45/80(2006.01)(22)申请日2021.01.19C07C45/81(2006.01)A61K31/122(2006.01)(71)申请人济南大学A61K31/11(2006.01)地址250022山东省济南市槐荫区南辛庄A61P31/10(2006.01)西路336号(72)发明人刘娜宋美娜孙钰琳吴聪杨凤英葛迪(74)专利代理机构北京卓特专利代理事务所(普通合伙)11572代理人段宇(51)Int.Cl.C07C47/46(2006.01)C07C49/743(2006.01)C07C45/78(2006.01)C07C45/79(2006.01)权利要求书2页说明书4页(54)发明名称两个杜松烷型和一个桉烷型倍半萜的制备方法及其在协同氟康唑抗耐药真菌中的应用(57)摘要本发明提供了两个杜松烷型和一个桉烷型倍半萜及其制备方法和在抗真菌活性中的应用，三个倍半萜分别为15‑oxo‑α‑cadinol，10α‑hydroxycadin‑4‑en‑15‑a，6β‑hydroxy‑4(15)‑eudesmen‑1‑one，上述三个倍半萜与氟康唑合用，对白色念珠菌(28A)表现出协同的抗真菌活性，并明显减少氟康唑的用量。本发明提取的活性化合物为抗真菌药物的研发提供了物质基础，有利于加拿大一枝黄花药用价值的进一步开发。CN112811998ACN112811998A权利要求书1/2页1.两个杜松烷型和一个桉烷型倍半萜，其结构如式(Ⅰ)所示：2.一类如权利要求1的三个倍半萜的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)加拿大一枝黄花干燥全草，粉碎后用95％乙醇浸提，浸提液浓缩得到粗浸膏；(2)粗浸膏悬浮于水中，然后用乙酸乙酯萃取，有机相浓缩后得到乙酸乙酯萃取物；(3)将乙酸乙酯萃取物过MCI树脂柱层析，用60％‑85％v/v的甲醇‑水洗脱得到主要洗脱成分；(4)将上述MCI60％v/v柱层析洗脱下来的成分过正向硅胶柱层析，依次用100:1、50：1、20：1、10：1、1：1v/v的氯仿‑甲醇洗脱，得到6个组分Fr.1‑Fr.6:(5)将组分Fr.3过正向硅胶柱层析，用10：1v/v的石油醚‑乙酸乙酯洗脱得到组分Fr.3.1‑Fr.3.8(6)将组分Fr.3.2经高效液相YMC‑packODS‑A色谱柱，用58％v/v的甲醇‑水洗脱，收集保留时间为57.5min和61.2min的组分，得到上述的一个杜松烷型(A)和桉烷型倍半萜类化合物的纯品(7)将组分Fr.3.3经高效液相YMC‑packODS‑A色谱柱，用64％v/v的甲醇‑水洗脱，收集保留时间为37.3min的组分，得到上述的另一个杜松烷型(B)倍半萜类化合物的纯品。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述加拿大一枝黄花与95％乙醇的料液比为1:2–3(w/v)。4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述加拿大一枝黄花粉碎至粒度直径小于3mm。5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述浸提次数为3次，每次时间为7天。6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，浓缩为原体积的1/100–1/150。7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述粗浸膏与水的比例为1:3–4(w/v)。8.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述乙酸乙酯与水的体积比为1:3–4；所述乙酸乙酯萃取次数为3次。9.如权利要求1所述的三个倍半萜在协同氟康唑抗耐药真菌中的应用。2CN112811998A权利要求书2/2页10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述真菌28A为对氟康唑(FLC)有耐药性的人口腔分离得到的白色念珠菌。3CN112811998A说明书1/4页两个杜松烷型和一个桉烷型倍半萜的制备方法及其在协同氟康唑抗耐药真菌中的应用技术领域本发明涉及天然药物化学领域，具体为两个杜松烷型和一个桉烷型倍半萜的制备方法及其在协同氟康唑抗耐药真菌中的应用。背景技术近年来，由于广谱抗菌药物，免疫抑制剂，抗肿瘤药物的广泛使用以及AIDS患者逐渐增多等因素，免疫抑制剂患者真菌感染率逐年上升，我国真菌感染发病率已达14.0％。因此耐药真菌引起的深度感染已成为当前困扰临床治疗的难题。临床上使用的抗真菌药物种类局限，不良反应大，一线药物易产生耐药，因此改良基础抗真菌药物，开发安全高效的新类型抗耐药菌药物的工作是当今药物研发领域的重点攻关方向之一。天然产物的结构多样性和易于与生物大分子结合的特点，决定了其在参与