一种红比利时杜鹃再生技术体系的建立方法及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112970583A(43)申请公布日2021.06.18(21)申请号202110128227.4(22)申请日2021.01.29(71)申请人浙江万里学院地址315100浙江省宁波市首南街道高教园区钱湖南路8号(72)发明人何凡吴月燕贾永红(74)专利代理机构宁波甬致专利代理有限公司33228代理人李迎春(51)Int.Cl.A01H4/00(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图2页(54)发明名称一种红比利时杜鹃再生技术体系的建立方法及其应用(57)摘要本发明公开了一种红比利时杜鹃再生技术体系的建立方法及其应用，该技术主要包括四大部分：一是以嫩叶为外植体诱导愈伤组织的产生；二是愈伤组织继代扩增；三是愈伤组织芽的诱导；四是愈伤组织根的诱导；红比利时杜鹃花作为一种国内外重要的观赏园艺杜鹃品种，开展组织快繁技术对于红比利时杜鹃花的快速产业化生产，以及开展分子遗传育种的研究都具有重要的现实意义和理论价值，本发明的红比利时杜鹃快繁技术有效地解决了目前繁育方法中繁殖困难、适应性低等问题，具有较高的商用以及推广价值，提供了一种高效、感染率低的红比利时杜鹃培育方法。CN112970583ACN112970583A权利要求书1/1页1.一种红比利时杜鹃再生技术体系的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)外植体准备、(2)愈伤组织诱导、(3)愈伤组织增殖、(4)芽的诱导、(5)根的诱导、(6)移栽；所述步骤(2)具体包括将步骤(1)处理后的外植体消毒后切块放入外植体诱导培养基中进行培养；所述步骤(3)具体包括将步骤(2)处理后的外植体放入愈伤组织培养基中进行培养；所述步骤(4)具体包括将步骤(3)处理后的外植体放入不定芽诱导培养基中进行培养；所述步骤(5)具体包括将步骤(4)处理后的外植体放入不定根诱导培养基中进行培养。2.根据权利要求1所述的一种红比利时杜鹃再生技术体系的建立方法，其特征在于：所述步骤(2)中采用的外植体诱导培养基的配方及其组成比例为：WPM粉2‑2.5g/L，蔗糖15‑25g/L，麦芽糖5‑15g/L，琼脂5‑10g/L，2,4‑D0.2‑0.4mg/L，TDZ0.2‑0.4mg/L，PPM抗菌剂0.01‑0.1μL/L，溶剂为水。3.根据权利要求1所述的一种红比利时杜鹃再生技术体系的建立方法，其特征在于：所述步骤(3)中采用的愈伤组织增殖培养基的配方及其组成比例为：WPM粉2‑2.5g/L，蔗糖15‑25g/L，麦芽糖5‑15g/L，琼脂5‑10g/L，活性炭1‑2g/L，6‑BA0.5‑1mg/L，TDZ1‑1.3mg/L，2,4‑D0.5‑1mg/L，溶剂为水。4.根据权利要求1所述的一种红比利时杜鹃再生技术体系的建立方法，其特征在于：所述步骤(4)中采用不定芽诱导培养基配方及其组成比例为：WPM粉2‑2.5g/L，蔗糖15‑25g/L，麦芽糖5‑15g/L，琼脂5‑10g/L，2,4‑D0.05‑0.15mg/L，TDZ0.2‑0.4mg/L，溶剂为水。5.根据权利要求1所述的一种红比利时杜鹃再生技术体系的建立方法，所述步骤(5)中采用不定根诱导培养基配方及其组成比例为：WPM粉2‑2.5g/L，蔗糖15‑25g/L，麦芽糖5‑15g/L，琼脂5‑10g/L，活性炭1‑2g/L，6‑BA0.1‑0.3mg/L，NAA0.5‑1mg/L，溶剂为水。6.根据权利要求1所述的一种红比利时杜鹃再生技术体系的建立方法，其特征在于：所述步骤(3)、(4)、(5)中培养的条件为：外植体在室温24℃，湿度65％RH，每天给予光照12小时；所述步骤(2)中培养的条件为：外植体在室温24℃，湿度65％RH，暗培养7天后，每天给予光照12小时。7.根据权利要求1所述的一种红比利时杜鹃再生技术体系的建立方法，其特征在于：所述步骤(2)‑(5)中还包括选择长势较好的愈伤组织进行继代培养的处理，且继代培养的周期为20‑25天。8.根据权利要求1所述的一种红比利时杜鹃再生技术体系的建立方法，其特征在于：所述步骤(2)的具体工艺为：将外植体置入酒精溶液中并搅拌，用无菌水清洗后将外植体置入氯化汞溶液中再次搅拌，继续用无菌水清洗后将外植体切割成0.5厘米×1厘米的长方块放入培养基中进行培养。9.根据权利要求1所述的一种红比利时杜鹃再生技术体系的建立方法，其特征在于：所述步骤(3)还包括对愈伤组织去褐化的步骤，具体的步骤如下：若发现愈伤组织出现褐化，将愈伤组织放到无菌环境下进行切割，切掉褐化部位，再接入新的培养基中培育。10.权利要求1‑9所述的高效、感染率低的红比利时杜鹃再生技术体系的应用，具体包括红比利时杜鹃及其相近种属的组织培养技术及产业化应用。2CN1