梅毒螺旋体(TP)抗体检验试剂盒及其制备和检测方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN101881772A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN101881772A(43)申请公布日2010.11.10(21)申请号201010215044.8(22)申请日2010.07.01(71)申请人南京工业大学地址210009江苏省南京市新模范马路5号南京工业大学(72)发明人林远王月华(51)Int.Cl.G01N33/571(2006.01)G01N33/532(2006.01)权利要求书1页说明书3页(54)发明名称梅毒螺旋体(TP)抗体检验试剂盒及其制备和检测方法(57)摘要本发明涉及一种基于流式微球载体技术的梅毒螺旋体(TP)抗体检验试剂盒及其制备和检测方法，属于免疫分析医学诊断技术领域。具体包括用TP重组抗原包被高聚分子微球，用牛血清白蛋白封闭空白结合点，制成特异性TP探针-高聚分子微球；与待测标本共培养捕获TP抗体，洗涤离心除去未结合的TP抗体，再加入荧光标记的抗人IgG或IgM抗体；使用流式细胞仪检测微球的荧光强度，对受测抗体进行定性或定量分析。本方法具有灵敏度高、特异性强、稳定性好的优点，并可对标本进行微量、多价分析。CN10872ACN101881772A权利要求书1/1页1.一种基于流式微球载体技术的梅毒螺旋体(TP)抗体检验试剂盒，其特征在于试剂盒的组分包括：重组TP抗原包被的微球载体、阴性对照血清、阳性对照血清、荧光标记抗体和浓缩样本稀释液。2.权利要求1所述的试剂盒，其特征在于微球载体是一种高聚分子微球，材质是乳胶、硅、树脂，或可塑性聚合材料，直径2-20微米，并且以共价键欧联重组TP抗原。3.权利要求1所述的试剂盒，其特征在于荧光标记抗体是荧光标记的羊、兔、鼠抗人免疫球蛋白中的一种或是几种。4.一种基于流式微球载体技术的梅毒螺旋体(TP)抗体检验试剂盒的制备方法，其特征在于：1)微球载体的制备：重组TP抗原与活化的高聚分子微球按比例混合，2-8℃温育4小时以上，用PBS缓冲液洗涤、离心、弃上清液，加入一定浓度的牛血清白蛋白封闭液，温育30分钟，完成流式微球载体的制备；2)其它组分的制备：阴性对照血清是健康人的血清，阳性对照血清为经确诊的TP抗体阳性血清，荧光标记抗体为羊、兔和鼠抗人免疫球蛋白抗体，样本稀释液中含有PBS、小牛血清白蛋白、叠氮钠。5.一种基于流式微球载体技术的梅毒螺旋体抗体检验试剂盒的检测，其特征在于借助流式细胞仪检测对TP抗体定性或定量检验，以及包括TP抗体在内的多价检测。6.权利要求5所述的试剂盒的检测，其特征在于定性检测是用阴性、阳性对照血清为参照，根据待测样品的荧光强度来定性，强度大于或等于阴性检测值的2.1倍时为阳性，小于时为阴性。7.权利要求5所述的试剂盒的检测，其特征在于定量检测是使用一组已知浓度的阳性对照血清，以此制作标准曲线，用以对受测样本的定量分析。8.权利要求5所述的试剂盒的检测，其特征在于包括TP抗体在内指标作多价检测，涉及使用不同直径微球载体和不同内置荧光的的混合物，每种微球载体包被一种探针，用该混合物与血清等样本在同一试管共培养，每种微球载体捕获一种特异性配体，最后使用流式细胞仪分析将其区分。9.权利要求5所述的试剂盒的检测，其特征在于借助流式细胞仪检测。2CN101881772A说明书1/3页梅毒螺旋体(TP)抗体检验试剂盒及其制备和检测方法技术领域[0001]本发明涉及一种基于流式微球载体技术的梅毒螺旋体(Treponemapallidum；TP)抗体检验试剂盒及其制备和检测方法，属于免疫分析医学诊断技术领域。背景技术[0002]梅毒近年来在我国的发病率呈逐年增加的趋势。2010年4月份卫生部公布，在全国27种法定报告的甲、乙类传染病中发病数居前五位的病种依次为病毒性肝炎、肺结核、痢疾、梅毒和甲型H1N1流感，其中梅毒排第三位，2009年为第四位，2005年为第五位。[0003]梅毒是人体感染苍白螺旋体后发生的不仅仅局限于皮肤或生殖系统的慢性全身性传染病，主要经性接触、母婴、血液传播。目前，检测感染者血清梅毒螺旋体抗体是诊断梅毒螺旋体感染的主要办法，分非特异性反应素抗体方法和检测特异性抗体方法两大类。甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)和快速血浆反应素试验(RPR)试验是目前国内采供血机构筛查献血者及医院初步诊断可以患者的梅毒血清学方法。TPPA法为确诊试验，特异性高，但是成本较高、操作繁琐、结果易受主观判断影响及不适于批量标本检测。，研究新的快速、简便、敏感且特异的诊断方法，对梅毒早期发现、治疗和防止扩散有重要意义。[0004]流式微球载体技术是使用流式细胞术和高聚分子微球载体检测生物分子的新技术。该技术在微载体表面进行免疫吸附反应，通过流式细胞仪测量示踪物的荧光强度，具有高灵敏度、分辨率和稳定