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(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102482705A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102482705A(43)申请公布日2012.05.30(21)申请号201080033830.4(74)专利代理机构永新专利商标代理有限公司(22)申请日2010.07.2972002代理人过晓东(30)优先权数据09/037572009.07.30FR(51)Int.Cl.C12Q1/04(2006.01)(85)PCT申请进入国家阶段日C12Q1/26(2006.01)2012.01.29(86)PCT申请的申请数据PCT/FR2010/0516202010.07.29(87)PCT申请的公布数据WO2011/012823FR2011.02.03(71)申请人生物梅里埃公司地址法国迈合西-兰托阿嘞(72)发明人A·詹姆斯S·欧伦加J·佩里V·L·萨尔瓦图拉S·斯坦福斯权利要求书权利要求书33页页说明书说明书99页页(54)发明名称硝基还原酶的新型酶底物(57)摘要具有式(I)的化合物及其盐在作为检测硝基还原酶活性的酶底物中或作为检测硝基还原酶活性中的酶底物和pH指示剂中的用途:其中:W1、W2、W3和W4独立地是H、Br、Cl、F、I、烷基、烷氧基、硫代甲基、全氟烷基、硝基、氰基、羧基(包括其酯或酰胺)或它们的任意组合;n=0、1或2;U和V是+N、NR、CZ4,R是H、烷基、芳烷基、芳基、烷酰基或烷+基磺酰基;优选地,如果U是CZ4,则V是N或NR;+如果V是CZ4,则U是N或NR;Z1、Z2、Z3和Z4独立地是H、Br、Cl、F、I、烷基、芳基、烷氧基、全氟烷基、硝基、氰基、羧基、磺酰基,包括羧基或磺酰基的酯或酰胺。CN1024875ACN102482705A权利要求书1/3页1.下式(I)的化合物及其盐作为检测硝基还原酶活性的酶底物的用途:其中:●W1、W2、W3和W4独立地是H、Br、Cl、F、I、烷基、烷氧基、硫代甲基、全氟烷基、硝基、氰基、羧基(包括羧基的酯或酰胺)、或它们的任意组合,●n=0、1或2,+●U和V是N、NR、CZ4,R是H、烷基、芳烷基、芳基、烷酰基或烷基磺酰基,优选地,如果++U是CZ4,则V是N或NR;如果V是CZ4,则U是N或NR,●Z1、Z2、Z3和Z4独立地是H、Br、Cl、F、I、烷基、芳基、烷氧基、全氟烷基、硝基、氰基、羧基、磺酰基,包括羧基或磺酰基的酯或酰胺。2.下式(I)的化合物及其盐作为检测硝基还原酶活性的酶底物和pH变化指示剂的用途:其中:●W1、W2、W3和W4独立地是H、Br、Cl、F、I、烷基、烷氧基、硫代甲基、全氟烷基、硝基、氰基、羧基(包括羧基的酯或酰胺)、或它们的任意组合,●n=0、1或2,+●U和V是N、NR、CZ4,R是H、烷基、芳烷基、芳基、烷酰基或烷基磺酰基,优选地,如果++U是CZ4,则V是N或NR;如果V是CZ4,则U是N或NR,●Z1、Z2、Z3和Z4独立地是H、Br、Cl、F、I、烷基、芳基、烷氧基、全氟烷基、硝基、氰基、羧基、磺酰基,包括羧基或磺酰基的酯或酰胺。3.根据权利要求1或2所述的式(I)化合物的用途,其中n=1。4.根据权利要求1-3中任一项所述的式(I)化合物的用途,其中W1、W2、W3和W4独立地是H。5.根据权利要求1-4中任一项所述的式(I)化合物的用途,其中U是CZ4,优选是CH。2CN102482705A权利要求书2/3页6.根据权利要求1-5中任一项所述的式(I)化合物的用途,其中V是N。7.根据权利要求1-5中任一项所述的式(I)化合物的用途,其中V是N+R。+8.根据权利要求1-5中任一项所述的式(I)化合物的用途,其中V是NCH3。9.根据权利要求1-8中任一项所述的式(I)化合物的用途,其中Z1、Z2、Z3和Z4是H。10.根据权利要求1或2所述的式(I)化合物的用途,其中所述化合物是4,4’-硝基苯乙烯基吡啶。11.根据权利要求1或2所述的式(I)化合物的用途,其中所述化合物是4-(4’-硝基苯乙烯基)-N-甲基吡啶鎓。12.检测微生物中的硝基还原酶活性的方法,其特征在于其包括以下步骤:a)提供检测和/或鉴定培养基,其包含式(I)的化合物及其盐其中:●W1、W2、W3和W4独立地是H、Br、Cl、F、I、烷基、烷氧基、硫代甲基、全氟烷基、硝基、氰基、羧基(包括羧基的酯或酰胺)、或它们的任意组合,●n=0、1或2,+●U和V是N、NR、CZ4,R是H、烷基、芳烷基、芳基、烷酰基或烷基磺酰基,优选地,如果++U是CZ4,则V是N或NR;如果V是CZ4,则U是N或NR,●Z1、Z2、Z3和Z4独立地是H、Br、Cl、F、I、烷基、芳基、烷氧基、全氟烷基、硝基、氰基、羧基、磺酰基,包括羧基或磺酰基的酯或酰胺,b