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(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102482708A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102482708A(43)申请公布日2012.05.30(21)申请号201080033839.5V·L·萨尔瓦图拉S·斯坦福斯(22)申请日2010.07.29(74)专利代理机构永新专利商标代理有限公司(30)优先权数据7200209/037562009.07.30FR代理人过晓东(85)PCT申请进入国家阶段日(51)Int.Cl.2012.01.29C12Q1/04(2006.01)C12Q1/26(2006.01)(86)PCT申请的申请数据PCT/FR2010/0516212010.07.29(87)PCT申请的公布数据WO2011/012824FR2011.02.03(71)申请人生物梅里埃公司地址法国迈合西-兰托阿嘞(72)发明人O·法布雷加A·詹姆斯S·奥伦加J·佩里权利要求书权利要求书44页页说明书说明书1010页页(54)发明名称硝基还原酶的新型酶底物(57)摘要本发明涉及具有式(I)的化合物及其盐在作为检测硝基还原酶的活性的酶底物中的用途:其中:W1、W2、W3和W4独立地是H、Br、Cl、F、I、烷基、烷氧基、硫代甲基、全氟烷基、硝基、氰基、羧基(包括其酯或酰胺)或它们的任意组合;n=0、1或++2;U是N或NR,并且V是CZ6、N或NR,或者V是+N或NR,并且U是CZ6,R是H、烷基、芳烷基、芳基、烷酰基或烷基磺酰基;Z1、Z2、Z3、Z4、Z5和Z6独立地是H、Br、Cl、F、I、烷基、芳基、烷氧基、全氟烷基、硝基、氰基、羧基、磺酰基,包括羧基或磺酰基的酯或酰胺。CN102487ACN102482708A权利要求书1/4页1.下式(I)的化合物及其盐作为检测硝基还原酶活性的酶底物的用途:其中,●W1、W2、W3和W4独立地是H、Br、Cl、F、I、烷基、烷氧基、硫代甲基、全氟烷基、硝基、氰基、羧基(包括其酯或酰胺)、或它们的任意组合,●n=0、1或2,+++●U是N或NR并且V是CZ6、N或NR,或者V是N或NR并且U是CZ6,R是H、烷基、芳烷基、芳基、烷酰基或烷基磺酰基,●Z1、Z2、Z3、Z4、Z5和Z6独立地是H、Br、Cl、F、I、烷基、芳基、烷氧基、全氟烷基、硝基、氰基、羧基、磺酰基,包括羧基或磺酰基的酯或酰胺。2.下式(I)的化合物及其盐作为检测硝基还原酶活性的酶底物和pH变化指示剂的用途:其中,●W1、W2、W3和W4独立地是H、Br、Cl、F、I、烷基、烷氧基、硫代甲基、全氟烷基、硝基、氰基、羧基(包括其酯或酰胺)、或它们的任意组合,●n=0、1或2,+++●U是N或NR并且V是CZ6、N或NR,或者V是N或NR并且U是CZ6,R是H、烷基、芳2CN102482708A权利要求书2/4页烷基、芳基、烷酰基或烷基磺酰基,Z1、Z2、Z3、Z4、Z5和Z6独立地是H、Br、Cl、F、I、烷基、芳基、烷氧基、全氟烷基、硝基、氰基、羧基、磺酰基,包括羧基或磺酰基的酯或酰胺。3.根据权利要求1或2所述的式(I)化合物的用途,其中n=1。4.根据权利要求1-3中任一项所述的式(I)化合物的用途,其中W1、W2、W3和W4独立地是H。5.根据权利要求1-4中任一项所述的式(I)化合物的用途,其中U是N或N+R,并且V是CZ6。+6.根据权利要求1-4中任一项所述的式(I)化合物的用途,V是N或NR,并且U是CZ6。7.根据权利要求1-6中任一项所述的式(I)化合物的用途,其中Z1、Z2、Z3、Z4、Z5和Z6是H。8.根据权利要求1或2所述的式(I)化合物的用途,其中所述化合物选自:2-(4’-硝基苯乙烯基)喹啉(2NSQ)、2-(4’-硝基苯乙烯基)-N-甲基喹啉鎓碘化物(2NSMQ+I)、2-(4’-硝基苯基)丁二烯基-N-甲基喹啉鎓碘化物(2NPBMQ+I)、4-(4’-硝基苯乙烯基)-N-甲基喹啉鎓碘化物(4NSMQ+I)和4-(4’-硝基-2’-甲氧基苯乙烯基)-N-甲基喹啉鎓碘化物(4NMSMQ+I)、4-(4’-硝基苯基)-2-甲基喹啉、2-(4’-硝基苯乙烯基)-N-甲基喹啉鎓TFA、4-(4’-硝基苯乙烯基)-N-苯甲基喹啉鎓TFA、4-(4’-硝基苯乙烯基)-N-甲基喹啉鎓氯化物、4-(4’-硝基苯乙烯基)喹那啶鎓氢溴化物、4-(4’-硝基苯乙烯基)喹那啶鎓甲碘化物、4-(4’-硝基苯乙烯基)喹啉TFA、2-(2’-吡啶基)-4-(4”-硝基苯乙烯基)喹啉、4-(4’-硝基苯乙烯基)-N-甲基喹啉鎓TFA。9.检测微生物中的硝基还原酶活性的方法,其特征在于其包括以下步骤:a)提供检测和/或鉴定培养基,其包含式(I)的化合物及其盐其中,●W1、W2、W3和W4独立地是