硝基还原酶的新型酶底物.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102482707A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102482707A(43)申请公布日2012.05.30(21)申请号201080033838.0V·L·萨尔瓦图拉S·斯坦福斯(22)申请日2010.07.29(74)专利代理机构永新专利商标代理有限公司(30)优先权数据7200209/037612009.07.30FR代理人过晓东(85)PCT申请进入国家阶段日(51)Int.Cl.2012.01.29C12Q1/04(2006.01)C12Q1/26(2006.01)(86)PCT申请的申请数据PCT/FR2010/0516232010.07.29(87)PCT申请的公布数据WO2011/012826FR2011.02.03(71)申请人生物梅里埃公司地址法国迈合西-兰托阿嘞(72)发明人O·法布雷加A·詹姆斯S·欧伦加J·佩里权利要求书权利要求书44页页说明书说明书88页页(54)发明名称硝基还原酶的新型酶底物(57)摘要本发明涉及具有式(I)的化合物及其盐在作为检测硝基还原酶活性的酶底物中的用途：其中：W1、W2、W3和W4独立地是H、Br、Cl、F、I、烷基、烷氧基、硫代甲基、全氟烷基、硝基、氰基、羧基(包括其酯或酰胺)或它们的任意组合；n＝0、1或2；X是NR、CZ5Z6、S或O，R是H、烷基、芳烷基、芳基、烷酰基或烷基磺酰基，Z5和Z6是烷基；Y是N或N+R，R是烷基、芳烷基、芳基、烷酰基或烷基磺酰基；Z1、Z2、Z3和Z4独立地是H、Br、Cl、F、I、烷基、芳基、烷氧基、全氟烷基、硝基、氰基、羧基、磺酰基，包括羧基或磺酰基的酯或酰胺。CN102487ACN102482707A权利要求书1/4页1.下式(I)的化合物及其盐作为检测硝基还原酶活性的酶底物的用途：其中，●W1、W2、W3和W4独立地是H、Br、Cl、F、I、烷基、烷氧基、硫代甲基、全氟烷基、硝基、氰基、羧基(包括其酯或酰胺)、或它们的任意组合，●n＝0、1或2，●X是NR、CZ5Z6、S或O，R是H、烷基、芳烷基、芳基、烷酰基或烷基磺酰基，Z5和Z6是烷基，●Y是N或N+R，R是烷基、芳烷基、芳基、烷酰基或烷基磺酰基，●Z1、Z2、Z3和Z4独立地是H、Br、Cl、F、I、烷基、芳基、烷氧基、全氟烷基、硝基、氰基、羧基、磺酰基，包括羧基或磺酰基的酯或酰胺。2.下式(I)的化合物及其盐作为检测硝基还原酶活性的酶底物和pH变化的指示剂的用途：其中，●W1、W2、W3和W4独立地是H、Br、Cl、F、I、烷基、烷氧基、硫代甲基、全氟烷基、硝基、氰基、羧基(包括其酯或酰胺)、或它们的任意组合，●n＝0、1或2，●X是NR、CZ5Z6、S或O，R是H、烷基、芳烷基、芳基、烷酰基或烷基磺酰基，Z5和Z6是烷基，●Y是N或N+R，R是烷基、芳烷基、芳基、烷酰基或烷基磺酰基，Z1、Z2、Z3和Z4独立地是H、Br、Cl、F、I、烷基、芳基、烷氧基、全氟烷基、硝基、氰基、羧基、2CN102482707A权利要求书2/4页磺酰基，包括羧基或磺酰基的酯或酰胺。3.根据权利要求1或2所述的式(I)化合物的用途，其中n＝1。4.根据前述权利要求中任一项所述的式(I)化合物的用途，其中W1、W2、W3和W4独立地是H。5.根据前述权利要求中任一项所述的式(I)化合物的用途，其中X是S或CZ5Z6，优选是CCH3CH3。+6.根据前述权利要求中任一项所述的式(I)化合物的用途，其中Y是N或NCH3。7.根据前述权利要求中任一项所述的式(I)化合物的用途，其中Z1、Z2、Z3和Z4是H。8.根据权利要求1或2所述的式(I)化合物的用途，其中所述化合物选自2-(4’-硝基苯乙烯基)苯并噻唑、2-(4’-硝基苯乙烯基)-N-甲基苯并噻唑鎓氯化物、2-(4’-硝基苯乙烯基)-1，3，3-三甲基吲哚鎓二溴化物。9.检测微生物中的硝基还原酶活性的方法，其特征在于其包括以下步骤：a)提供检测和/或鉴定培养基，其包含式(I)的化合物及其盐其中，●W1、W2、W3和W4独立地是H、Br、Cl、F、I、烷基、烷氧基、硫代甲基、全氟烷基、硝基、氰基、羧基(包括其酯或酰胺)、或它们的任意组合，●n＝0、1或2，●X是NR、CZ5Z6、S或O，R是H、烷基、芳烷基、芳基、烷酰基或烷基磺酰基，Z5和Z6是烷基，●Y是N或N+R，R是烷基、芳烷基、芳基、烷酰基或烷基磺酰基，●Z1、Z2、Z3和Z4独立地是H、Br、Cl、F、I、烷基、芳基、烷氧基、全氟烷基、硝基、氰基、羧基、磺酰基，包括羧基或磺酰基的酯或酰胺，b)使用待测试的生物样品接种所述培养基，c)进行温育，和d)检测至少一种硝基还原酶活性的存在。10.检测微生物中硝基还原酶活性和pH变化的方