一种利用愈伤组织再生途径快速繁殖黄檗的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102613084A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102613084A(43)申请公布日2012.08.01(21)申请号201210099444.6(22)申请日2012.04.06(71)申请人东北林业大学地址150040黑龙江省哈尔滨市香坊区和兴路26号申请人王慧梅(72)发明人王慧梅王文杰陈亚杰于海娣祖元刚(51)Int.Cl.A01H4/00(2006.01)权利要求书权利要求书11页页说明书说明书33页页(54)发明名称一种利用愈伤组织再生途径快速繁殖黄檗的方法(57)摘要本发明提供了一种利用愈伤组织再生途径快速繁殖黄檗的方法。本发明采用黄檗无菌苗茎段为外植体，培养在MS+BA1.5mg/l+NAA0.5mg/l+葡萄糖20g/l+琼脂6.0g/l的培养基上，愈伤组织诱导率为100％，愈伤组织不定芽发生率可达75.4％，每个外植体平均再生不定芽数为14.7。将再生的不定芽继续在继代增殖培养基MS+BA0.5mg/l+蔗糖20g/l+琼脂6.0g/l上培养，一个月后增殖倍数平均为3.4。将再生苗在1/4MS+IBA0.8mg/l+蔗糖20g/l+琼脂6.0g/l的培养基上进行生根培养，不定根的发生频率为90.6％，平均再生的不定根数为4.3。对生长健壮的再生苗进行移栽，移栽成活率为100％。本发明中黄檗离体茎段不定芽发生的再生系统具有高频性和可重复性，培养周期短，为黄檗组织培养快速繁殖及利用基因工程改良黄檗打下了很好基础。CN1026384ACN102613084A权利要求书1/1页1.一种利用愈伤组织再生途径快速繁殖黄檗的方法，其特征在于：1)黄檗无菌苗获得；2)以黄檗无菌苗茎段为外植体；3)黄檗茎段愈伤组织诱导和不定芽再生；4)获得的再生芽在继代增殖培养基上进行增殖培养；5)再生苗生根及土壤移栽。2.根据权利要求1所述的利用愈伤组织再生途径快速繁殖黄檗的方法，其主要特征在于：采用黄檗休眠芽，经常规灭菌后，接种在MS+6-BA1.0mg/l+蔗糖20g/l+琼脂6.0g/l上，约1个半月左右获得黄檗的无菌苗。3.根据权利要求1所述的利用愈伤组织再生途径快速繁殖黄檗的方法，其主要特征在于：以获得的黄檗无菌苗茎段为外植体，进行愈伤组织诱导和不定芽再生。4.根据权利要求1所述的利用愈伤组织再生途径快速繁殖黄檗的方法，其主要特征在于：黄檗无菌苗茎段愈伤组织诱导和不定芽再生的最佳培养基为：MS+6-BA1.5mg/l+NAA0.5mg/l+葡萄糖20g/l+琼脂6.0g/l。5.根据权利要求1所述的利用愈伤组织再生途径快速繁殖黄檗的方法，其主要特征在于：将获得的不定芽继续在继代增殖培养基上进行增殖培养，继代增殖的基本培养基为：MS+6-BA0.5mg/l+蔗糖20g/l+琼脂6.0g/l。6.根据权利要求1所述的利用愈伤组织再生途径快速繁殖黄檗的方法，其主要特征在于：将生长健壮再生苗进行生根培养，生根培养的基本培养基为1/4MS+IBA0.8mg/l+蔗糖20g/l+琼脂6.0g/l。生根培养三周后，将根系发育好的再生苗进行移栽，移栽基质为泥炭土和沙子比例为1∶1。2CN102613084A说明书1/3页一种利用愈伤组织再生途径快速繁殖黄檗的方法技术领域：[0001]本发明是一种通过愈伤组织再生途径快速繁殖黄檗的方法，操作简单且周期短，不定芽再生频率高，繁殖速度快。本发明属于农业生物技术领域。背景技术：[0002]黄檗(PhellodendronamurenseRupr.)属芸香科(Rutaceae)黄檗属，是我国东北地区三大珍贵阔叶树种，是重要的药用植物和用材树种，为第三世纪古热带区系孑遗植物，是国家二级保护渐危种(范继红，2006)。黄檗体内重要的次生代谢产物小檗碱是传统中药黄连的主要有效成分，具有抗炎、抗肿瘤、提高免疫力等功效。黄檗的木材可用来制作家具和工艺品，而且是工业用软木塞和黄色染料的来源。黄檗的商业开发和传统的无性繁殖由于黄檗种子育性差，较低的萌发率和扦插繁殖较差的生根能力而受到限制(MukaiandYokoyama，1985)，而组织培养能够有效地解决这个问题，通过愈伤组织再生途径大量繁殖黄檗是药用植物快速增殖的有效途径(CastilloandJordan，1997)。[0003]目前在黄檗的组织培养方面研究相对较少，采用黄檗的种子为外植体(赵波，东北林业大学硕士学位论文，2007)已见研究报道，但采用种子为外植体处理起来比较麻烦，因为每次外植体都需要灭菌处理，如果灭菌不彻底，容易引发外植体大批污染。而本发明以黄檗无菌苗茎段为外植体，外植体取材容易且比较方便，操作简单，再生周期短，能够在短期内获得大量的再生苗木，为黄檗的快速繁殖和利用基因工程育种打下很好