虎皮兰花蕾愈伤成苗的快速繁殖方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105432471A(43)申请公布日2016.03.30(21)申请号201510922037.4(22)申请日2015.12.14(71)申请人广西壮族自治区药用植物园地址530023广西壮族自治区南宁市长岗路189号(72)发明人王晓峰李刚韦坤华农东新缪剑华李林轩李翠王一诺(74)专利代理机构北京远大卓悦知识产权代理事务所(普通合伙)11369代理人靳浩(51)Int.Cl.A01H4/00(2006.01)权利要求书2页说明书7页(54)发明名称虎皮兰花蕾愈伤成苗的快速繁殖方法(57)摘要本发明公开了一种虎皮兰花蕾愈伤成苗的快速繁殖方法，包括以下步骤：步骤一、取虎皮兰的花蕾作外植体置于诱导培养基中培养，得第一愈伤组织；步骤二、将步骤一得到的第一愈伤组织置于分化培养基中培养，得到丛生芽；步骤三、将步骤二得到的丛生芽置于壮苗培养基中培养，得到植株；步骤四、将步骤二得到的植株置于生根培养基中培养，得到带根植株；本发明得到的虎皮兰组培苗繁殖系数高达30-50倍，生根率95％以上，成活率100％，有效解决虎皮兰工厂化育苗的问题。CN105432471ACN105432471A权利要求书1/2页1.一种虎皮兰花蕾愈伤成苗的快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、取虎皮兰的花蕾作外植体置于诱导培养基中培养，得第一愈伤组织；其中，所述诱导培养基包括：MS、0.2-2.0mg/L的2,4-二氯苯氧乙酸、0.5-2.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、30mg/L的蔗糖和5mg/L的琼脂，调整诱导培养基的pH为5.8；步骤二、将步骤一得到的第一愈伤组织置于分化培养基中培养，得到丛生芽；其中，所述分化培养基包括：MS、0.5-2.0mg/L的玉米素、0.2-1.0mg/L的吲哚丁酸、30mg/L的蔗糖和5mg/L的琼脂，调整分化培养基的pH为5.8；步骤三、将步骤二得到的丛生芽置于壮苗培养基中培养，得到植株；其中，所述壮苗培养基包括：MS、0.5-2.5mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0.1-0.5mg/L的萘乙酸、30mg/L的蔗糖和5mg/L的琼脂，调整壮苗培养基的pH为5.8；步骤四、将步骤二得到的植株置于生根培养基中培养，得到带根植株；其中，所述生根培养基包括：1/2MS、0.1-1.0mg/L的萘乙酸、30mg/L的蔗糖和5mg/L的琼脂，调整生根培养基的pH为5.8。2.如权利要求1所述的虎皮兰花蕾愈伤成苗的快速繁殖方法，其特征在于，所述步骤一中，将外植体置于诱导培养基之前需经消毒处理，具体为：将外植体用2％的洗洁精水溶液浸泡20分钟，之后用线状自来水冲洗外植体15-20分钟，将冲洗后的外植体置于添加2-3滴吐温-20的0.1％的升汞溶液中浸泡8-10分钟，取出后用无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸去除外植体表面的水分，即得消毒后的外植体；其中，所述无菌水为经高压灭菌的蒸馏水。3.如权利要求1所述的虎皮兰花蕾愈伤成苗的快速繁殖方法，其特征在于，所述步骤四之后，还包括：步骤五：将步骤四得到的带根植株连同培养瓶一起放入25℃的环境中，打开培养瓶盖，向培养瓶内添加自来水，炼苗4-7天，待带根植株的表面角质形成后取出，洗净根部培养基后移栽至沙床中，在沙床中生长一个月后移栽到苗圃。4.如权利要求1所述的虎皮兰花蕾愈伤成苗的快速繁殖方法，其特征在于，在诱导培养基中培养的培养条件：培养温度为22-26℃，黑暗条件下培养25-35天；在分化培养基中培养的培养条件：培养温度为22-26℃，光照强度为1500lux，光照时间为8-10小时/天，培养30天；在壮苗培养基中培养的培养条件：培养温度为22-26℃，光照强度为1500lux，光照时间为8-10小时/天，培养30天；在生根培养基中培养的培养条件：培养温度为22-26℃，光照强度为1500lux，光照时间为8-10小时/天，天培养30天。5.如权利要求2所述的虎皮兰花蕾愈伤成苗的快速繁殖方法，其特征在于，所述外植体在消毒后且置于诱导培养基之前还经过了预处理，具体为：将外植体浸于诱导膏中，并放入微波发生器中反应，在输出功率为450瓦下反应5min，随后在输出功率为350瓦下反应10min；其中，所述诱导膏包括以下重量份的原料混合而成：10-15份香蕉泥、1-5份琼脂、3-6份芒果叶提取物、3-6份千年健提取物和1000份水。6.如权利要求3所述的虎皮兰花蕾愈伤成苗的快速繁殖方法，其特征在于，带根植株的表面角质形成后在角质表面涂覆厚度为1-3mm的营养剂后再移栽至沙床，所述营养剂包括：0.0035份的麦芽硒、0.2份的藻朊酸、3-5份的竹醋液和100份的水。2CN105432471A权利要求书2/2页7.如权利要求6所述的