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(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102719533A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102719533A(43)申请公布日2012.10.10(21)申请号201210172121.5(22)申请日2012.05.30(71)申请人徐君怡地址116001辽宁省大连市中山区长江东路60号申请人曹际娟赵昕曹冬梅(72)发明人徐君怡曹际娟赵昕曹冬梅(74)专利代理机构大连东方专利代理有限责任公司21212代理人贾汉生(51)Int.Cl.权利要求书权利要求书11页页说明书说明书99页页C12Q1/68(2006.01)序列表序列表44页页附图附图44页页(54)发明名称同步检测10种转基因玉米品系的试剂盒、及其使用方法(57)摘要本发明公开一种实时荧光RCA技术同步检测10种转基因玉米品系的试剂盒、及其使用方法,属于转基因食品检测技术领域,其通过锁式探针RCA技术与实时荧光PCR技术相结合,建立了实时荧光PCR-锁式通用探针滚环扩增(RCA),针对10种转基因玉米品系分别设计锁式探针SEQIDNO:1~10,通过滚环扩增技术与待检测样品中的靶标序列互补结合,在连接酶作用下使探针环化;进一步通过滚环扩增的通用引物区,实现环状锁式探针的级联扩增;本发明试剂盒具有高通量、特异性、准确性、高灵敏等特点,锁式探针独特的设计,满足了专化性检测的需要,而且可以结合多种扩增方式及检测标记物,适应多种检测平台,填补了国内外空白。CN1027953ACN102719533A权利要求书1/1页1.一种转基因玉米品系检测试剂盒,其特征在于:包括锁式探针序列SEQIDNO:1~10中至少一种。2.根据权利要求1所述的一种转基因玉米品系检测试剂盒,其特征在于:包括锁式探针序列SEQIDNO:1~10中至少一种以及SEQIDNO:11~12中至少一种。3.根据权利要求2所述的一种转基因玉米品系检测试剂盒,其特征在于:包括锁式探针序列SEQIDNO:1~10以及SEQIDNO:11~12中至少一种。4.根据权利要求3所述的一种转基因玉米品系检测试剂盒,其特征在于:包括下述锁式探针序列SEQIDNO:1~12。5.如权利要求1~4中任一项所述的一种转基因玉米品系检测试剂盒,其特征在于:还包括通用引物SEQIDNO:13和SEQIDNO:14。6.一种同步检测转基因玉米品系的方法,其操作步骤包括:①将待测转基因玉米品系的干燥种子研磨成粉末,分别提取基因组DNA;②基因组DNA的消化取步骤①获得的基因组DNA1500ng,于37℃过夜消化;再95℃加热10min使酶失活;其中,消化反应的体系为:1500ng步骤①获得的基因组DNA,10μL的1×NEB4缓冲液,终浓度为0.33U/μL的SmaI,终浓度为0.33U/μL的NheI,终浓度为0.33U/μL的EcoRI,终浓度为0.1μg/μL的BSA,蒸馏水补充终体积为30μL;③锁式探针连接取步骤②获得的产物4μL;2μL的1×TaqDNA连接缓冲液,1μL的1UTaqDNA连接酶,25pM的锁式探针1μL,用蒸馏水补充终体积为10μL;其中,所述的锁式探针为SEQIDNO:1~12中至少一种;反应条件:94℃5min;95℃30s,65℃5min,进行30个循环;使其环化;④实时荧光PCR反应:步骤③所得的产物5μL;通用引物SEQIDNO:13和SEQIDNO:14分别200nM;反应条件:95℃,3min;95℃,10s;60℃,15s;72℃20s;40个循环;95℃5min。2CN102719533A说明书1/9页同步检测10种转基因玉米品系的试剂盒、及其使用方法技术领域[0001]本发明属于转基因食品检测技术领域,具体涉及实时荧光RCA技术同步检测10种转基因玉米品系的试剂盒、及其在检测转基因玉米品系中的应用。背景技术[0002]随着现代生物技术的发展,转基因食品已逐步进入普通百姓的生活。由于转基因食品所具有的潜在非安全性,为保护广大消费者的权益,满足其选择权和知情权以及出于国际贸易的需要,转基因食品的检测越来越引起各国政府和有关食品监督机构的重视。[0003]目前转基因产品检测方法分为两大类:[0004]1、免疫学检测法[0005]免疫学检测法是从蛋白质水平对转基因食品进行检测,即对外源蛋白质的测定。可将其分为Western杂交、酶联免疫法(ELISA)、试纸条法和快速检测试剂盒法。免疫学检测法,其基本原理是通过抗原(antigen)抗体(antibody)之间的特异性反应来实现的。这种方法的不足在于:第一,由于抗原抗体反应的专一性,因此一种试剂盒只针对一特定转基因产物,无法高通量、快速的检测具有多种混合成分的食品样品;第二,加工过的转基因食品中的蛋白质抗原性很容易破坏,从而影响检