减毒的猪流感疫苗及其制备和使用方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN104582725A(43)申请公布日2015.04.29(21)申请号201380043383.4C12N7/00(2006.01)(2006.01)(22)申请日2013.07.11A61P31/04(30)优先权数据61/672,3982012.07.17US(85)PCT国际申请进入国家阶段日2015.02.15(86)PCT国际申请的申请数据PCT/US2013/0500002013.07.11(87)PCT国际申请的公布数据WO2014/014726EN2014.01.23(71)申请人梅里亚有限公司地址美国佐治亚(72)发明人B·M·豪斯(74)专利代理机构中国国际贸易促进委员会专利商标事务所11038代理人袁泉(51)Int.Cl.A61K39/145(2006.01)权利要求书2页说明书14页序列表42页附图3页(54)发明名称减毒的猪流感疫苗及其制备和使用方法(57)摘要本公开内容提供了减毒的猪流感毒株，特别是经由反向遗传学方法产生的那些，包含其的组合物，以及其生产和使用方法。相对于由相应的剧毒亲本病毒编码的HA蛋白质，减毒的毒株经改造为编码具有另外的糖基化位点的HA蛋白质。有利地，可以施用减毒的流感毒株。CN104582725ACN104582725A权利要求书1/2页1.一种减毒的猪流感毒株，其能够在猪中提供针对流感或由流感引起的疾病的安全有效的免疫应答。2.权利要求1的毒株，其编码相对于剧毒亲本株具有至少1个另外的糖基化位点的HA基因。3.权利要求2的毒株，其编码相对于剧毒亲本株具有至少4个另外的糖基化位点的HA基因。4.权利要求3的毒株，其中所述糖基化位点选自S71N、K90N、L173T、P287T和K294T，并且其中所述氨基酸变化的位置是基于由具有如SEQIDNO:18所示的序列的剧毒亲本株编码的HA基因。5.权利要求4的毒株，其编码具有如SEQIDNO:22所示的序列或与SEQIDNO:22具有至少90％同源性的序列的HA蛋白质，条件是下述位置具有下述氨基酸：71N、90N、173T、287T和294T。6.权利要求5的毒株，其中所述HA蛋白质具有如SEQIDNO:22所示的序列。7.权利要求4的毒株，其编码具有如SEQIDNO:24所示的序列或与SEQIDNO:24具有至少90％同源性的序列的HA蛋白质，条件是下述位置具有下述氨基酸：71N、90N、173T、287T。8.权利要求7的毒株，其中所述HA蛋白质具有如SEQIDNO:24所示的序列。9.一种免疫组合物，其包含权利要求4-8中任一项的减毒株。10.权利要求9的组合物，其进一步包含药学或兽医学可接受的媒介物、稀释剂或赋形剂，并且其在猪中提供针对剧毒猪流感攻击的保护性免疫应答。11.权利要求10的组合物，其进一步包含与除猪流感外的猪病原体相关或衍生自与除猪流感外的猪病原体的至少一种另外的抗原。12.权利要求11的组合物，其中所述至少一种或多种另外的抗原能够在猪中引发针对M.hyo、PCV2、PRRSV、SIV或能够在猪中感染且引起疾病或对疾病的敏感性的其他病原体的免疫应答。13.一种给动物接种疫苗的方法，其包括至少一次施用包含权利要求10的组合物。14.权利要求13的方法，其中所述猪是分娩前约3周至约6周的母猪。15.权利要求14的方法，其中与来自未接种疫苗的母猪的仔猪相比较，所述所得到的仔猪具有降低的发病率和/或死亡率。16.一种包含用于产生减毒的猪流感的多种载体的组合物，所述多种载体包括包含与流感病毒HAcDNA可操作地连接的启动子的载体，其中相对于由剧毒亲本猪流感毒株编码的HA，所述HAcDNA编码另外的糖基化位点。17.权利要求16的组合物，其中所述另外的糖基化位点选自S71N、K90N、L173T、P287T和K294T，并且所述氨基酸变化的数是基于由具有如SEQIDNO:18所示的序列的剧毒亲本株编码的HA基因。18.权利要求17的组合物，其中用于产生减毒流感的所述HAcDNA编码如SEQIDNO:22或24所示的蛋白质。19.一种制备流感病毒的方法，其包括：使细胞与对于获得传染性流感病毒有效的量的权利要求16-18中任一项的组合物接触。2CN104582725A权利要求书2/2页20.一种细胞，其包含权利要求19的多种载体。3CN104582725A说明书1/14页减毒的猪流感疫苗及其制备和使用方法[0001]通过引用并入[0002]本申请要求于2012年7月17日提交的临时申请USSN61/672,398的优先权，且通过引用将其整体并入本文。发明领域[0003]本发明一般涉及减毒的病毒疫苗，特别是对猪提供抵抗由猪流感引起的感染/疾病的广泛、