一种谷氨酸棒杆菌及其构建方法与应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106635944A(43)申请公布日2017.05.10(21)申请号201611249268.4C12R1/15(2006.01)(22)申请日2016.12.29(83)生物保藏信息CGMCCNo.134072016.11.30(71)申请人廊坊梅花生物技术开发有限公司地址065001河北省廊坊市开发区华祥路66号(72)发明人孙雪胡丹刁刘洋毛贤军(74)专利代理机构北京集佳知识产权代理有限公司11227代理人赵青朵(51)Int.Cl.C12N1/21(2006.01)C12N15/77(2006.01)权利要求书1页说明书5页C12P13/08(2006.01)序列表2页附图1页(54)发明名称一种谷氨酸棒杆菌及其构建方法与应用(57)摘要本发明属于微生物领域，具体涉及一种谷氨酸棒杆菌及其构建方法与应用。本发明所述谷氨酸棒杆菌，具有L-赖氨酸生产能力并且其细胞内赖氨酸输出蛋白和丙酮酸羧化酶活性同时增强。本发明所述谷氨酸棒杆菌增强了赖氨酸输出蛋白的活性从而促进L-赖氨酸的积累，增加L-赖氨酸的产量，同时增强丙酮酸羧化酶活性，为L-赖氨酸合成提供更多前体，进一步提高L-赖氨酸的积累能力，使培养基中L-赖氨酸的量增多，进而提高菌株发酵产L-赖氨酸的能力。实验表明本发明所述谷氨酸棒杆菌为L-赖氨酸高产菌株，能有效积累L-赖氨酸，提高L-赖氨酸的产量，为L-赖氨酸的工业化生产奠定了基础。CN106635944ACN106635944A权利要求书1/1页1.一种谷氨酸棒杆菌，其特征在于，具有L-赖氨酸生产能力并且其细胞内赖氨酸输出蛋白和丙酮酸羧化酶活性同时增强。2.根据权利要求1所述的谷氨酸棒杆菌，其特征在于，具有L-赖氨酸生产能力并且其细胞内编码赖氨酸输出蛋白的lysE基因和编码丙酮酸羧化酶的pyc基因表达同时增强。3.根据权利要求1所述的谷氨酸棒杆菌，其特征在于，具有L-赖氨酸生产能力并且其细胞内编码赖氨酸输出蛋白的lysE基因的拷贝数增加和编码丙酮酸羧化酶的pycP458S基因的增强。4.根据权利要求1所述谷氨酸棒杆菌，其特征在于，所述谷氨酸棒杆菌保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.13407。5.权利要求1所述谷氨酸棒杆菌的构建方法，其特征在于，包括：步骤A、构建编码lysE基因的重组载体，转化谷氨酸棒杆菌MHZ-0912-1中获得重组菌株；步骤B、构建pycP458S的重组载体，转化步骤1获得的重组菌株即得。6.根据权利要求5所述构建方法，其特征在于，所述载体为pK18mobsacB。7.权利要求1-4任意一项所述谷氨酸棒杆菌在发酵生产L-赖氨酸中的应用。8.一种L-赖氨酸的生产方法，其特征在于，将保藏编号为CGMCCNo.13407的谷氨酸棒杆菌接种于发酵培养基中发酵。9.根据权利要求8所述生产方法，其特征在于，所述发酵培养基由葡萄糖60g/L，(NH4)2SO425g/L，KH2PO42.0g/L，MgSO4·7H2O1.0g/L，豆粕水解液10g/L，CaCO330g/L组成，pH7.0。10.根据权利要求8所述生产方法，其特征在于，所述发酵条件为33℃，发酵14-15h。2CN106635944A说明书1/5页一种谷氨酸棒杆菌及其构建方法与应用技术领域[0001]本发明属于微生物领域，具体涉及一种谷氨酸棒杆菌及其构建方法与应用，尤其是涉及一种产L-赖氨酸的谷氨酸棒杆菌及其构建方法与应用背景技术[0002]L-赖氨酸(L-Lysine)，学名为L-2,6-二氨基己酸，分子式为C6H14N2O2.HCL，分子量为182.65。L-赖氨酸是蛋白质的重要组分之一，是人体不能自身合成但又十分需要的八种氨基酸之一，可以提高蛋白质的利用率，从而大大强化食品的营养，起到促进生长发育、增加食欲、减少疾病、增强体质的作用。[0003]L-赖氨酸是世界上第二大氨基酸生产品种，广泛应用于动物饲料、医药和食品工业。其中约90％用于饲料工业，10％用于食品和医药行业。用于动物饲料添加剂，L-赖氨酸可帮助机体吸收其他氨基酸，从而提高饲料质量。[0004]L-赖氨酸最初是从蛋白质水解物中分离得到的，蛋白质水解法一般以动物血粉为原料，此法最多的特点是工艺流程简单，但是原料来源很有限，仅适合小规模生产。此后又出现了化学合成法、水解法、酶法。Gilvarg等于上世纪50年代首先报道了肠杆菌属的一株代表菌株结肠芽孢杆菌生物合成赖氨酸途经。1957年日本开始采用野生菌株发酵法生产谷氨酸，1960年日本的本下祝郎等用紫外线照射谷氨酸棒杆菌得到一株营养缺陷性变异株，从此开始了发酵法工业生产商品赖氨酸。[0005]现在，工业上主要采用发酵法生