一种杨梅菌种驯化方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109609429A(43)申请公布日2019.04.12(21)申请号201910030652.2C12G3/024(2019.01)(22)申请日2019.01.14C12R1/865(2006.01)(71)申请人扶明明地址341000江西省赣州市章贡区渡口路34号陆通佳苑1栋A703A室(72)发明人扶明明何名芳张红宇丁小礼甘易华(74)专利代理机构重庆市信立达专利代理事务所(普通合伙)50230代理人包晓静(51)Int.Cl.C12N1/36(2006.01)C12N1/18(2006.01)C12N11/10(2006.01)C12N11/08(2006.01)权利要求书2页说明书7页附图1页(54)发明名称一种杨梅菌种驯化方法(57)摘要本发明属于果酒发酵技术领域，公开了一种杨梅菌种驯化方法，利用葡萄酒酵母驯化出适合于杨梅酒生产的酵母菌株，采用固定化酵母发酵生产杨梅酒，采用自然落地杨梅次果为主要原料，合理的利用次果，出了药食两用植物代替SO2作为抗氧化剂。本发明杨梅榨汁条件其出汁率高达75％，呈红色、澄清透明，果香浓郁、与酒香协调，酒体丰满醇厚，纯净新鲜爽怡口感，味道纯正、完整，协调适口无异味；提高杨梅的种植和加工效益，促进发酵型杨梅酒的规模化生产经营，带动杨梅种植业的发展，提高杨梅的产业化水平，增强我国杨梅产业的国际竞争能力；选出药食两用植物代替SO2作为抗氧化剂，不但效果显著，还增强了酒的风味；同时填补了赣南市场的空白。CN109609429ACN109609429A权利要求书1/2页1.一种杨梅菌种驯化方法，其特征在于，所述杨梅菌种驯化方法将葡萄酒酵母从斜面试管分别接种到不同浓度梯度杨梅汁的培养基当中，在30℃下培养2天，观察气泡产生情况，采用血球计数法测菌体浓度，取杨梅原汁浓度较高且菌体浓度大的稀释涂平板，杨梅汁中加2％营养琼脂，制成固体培养基，30℃下培养，挑取最大尽量菌落，不断重复以上操作，直至出现酵母在较高浓度杨梅汁中起酵时间在24小时以内的，取发酵液稀释涂平板，挑取大菌落涂斜面保存。2.如权利要求1所述的杨梅菌种驯化方法，其特征在于，所述杨梅菌种驯化方法包括以下步骤：(1)配制杨梅汁质量比含量20％、4-6°Bx麦汁质量比含量80％的培养液100ml，加入活化的酵母10ml，在30℃温度下培养，前12小时通氧3次，每4小时通一次；12小时后停止通氧，培养至出现大量气泡，检测酵母浓度大于2.5×108个/ml时，进行下一步操作；(2)配制杨梅汁质量比含量40％、4-6°Bx麦汁质量比含量60％，调整糖度至20°Bx的培养液100ml，加入培养的酵母10ml，在30℃温度下培养，前16小时每4小时通氧一次；16小时后停止通氧，培养至出现大量气泡，检测酵母浓度大于2.5×108个/ml时，进行下一步操作；(3)配制杨梅汁质量比含量60％、4-6°Bx麦汁含量40％，调整糖度至20°Bx的培养液100ml，加入培养的酵母10ml，在30℃温度下培养，前20小时每4小时通氧一次；20小时后停止通氧，培养至出现大量气泡，检测酵母浓度大于2.5×108个/ml时，进行下一步操作；(4)配制杨梅汁含质量比量80％、4-6°Bx麦汁含质量比量80％，调整糖度至20°Bx的培养液100ml，加入培养的酵母10ml，在30℃温度下培养，前24小时每4小时通氧一次；24小时后停止通氧，培养至出现大量气泡，检测酵母浓度大于2.5×108个/ml时，进行下一步操作；(5)配制杨梅汁质量比含量100％，调整糖度至20°Bx的培养液100ml，加入上一步骤培养的酵母10ml，在30℃温度下培养，前28小时每4小时通氧一次；28小时后停止通氧，培养至出现大量气泡，检测酵母浓度大于2.5×108个/ml时，进行下一步操作；(6)将所得酵母培养液在无菌条件下1000r/min离心10min，倾去上清液，用无菌生理盐水洗涤菌体，再离心得湿菌体，加入无菌水制成菌悬液；(7)配制2％海藻酸钠和6％聚乙烯醇混合载体溶液灭菌冷却后，与菌悬液混合均匀，凝7胶内包埋菌量大于4.7×10cfu/ml，用注射器将其注入交联剂CaCl2溶液中，形成小球，在交联剂中硬化4h，用无菌水洗涤；(8)将步骤(7)中配制的包埋菌小球10个，置于100ml杨梅汁质量比含量100％、糖度20°Bx的培养液中，在30℃温度下培养，前12h每4小时通氧一次，12h后停止通氧，培养至出现大量气泡；(9)破碎步骤(8)包埋菌小球，放置于杨梅汁质量比含量100％，调整糖度至20°Bx的培养液100ml中，在30℃温度下培养，前28小时每4小时通氧一次；28小时后停止通氧，培养至出现大量气泡，检测酵母