一种与公猪繁殖性状相关的circRNA及应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110982910A(43)申请公布日2020.04.10(21)申请号201911321057.0(22)申请日2019.12.19(71)申请人华中农业大学地址430070湖北省武汉市洪山区狮子山街1号(72)发明人徐德全孟东杰刘敏张龙周昌繁(74)专利代理机构武汉宇晨专利事务所42001代理人张红兵(51)Int.Cl.C12Q1/6888(2018.01)C12N15/113(2010.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书6页序列表4页附图3页(54)发明名称一种与公猪繁殖性状相关的circRNA及应用(57)摘要本发明属于家畜分子生物学技术领域，具体涉及一种与公猪繁殖性状相关的circRNA及应用。所述circRNA为circSETD2，其线性核苷酸序列如SEQIDNO：1所示。本发明针对circSETD2设计特异性扩增引物，经PCR扩增及RNaseR酶消化验证所述的circSETD2的真实存在。利用荧光定量PCR检测到circSETD2在猪睾丸支持细胞以及在输精管、附睾头中高表达。在75d和270d“梅山”公猪睾丸中表达量极显著高于同日龄“杜洛克”公猪睾丸中表达量(p<0.01)。本发明公开的circSETD2有望作为与公猪繁殖相关的分子标志物，在种公猪的选择评定及遗传改良中具有较大的应用价值。CN110982910ACN110982910A权利要求书1/1页1.一种与公猪繁殖相关的circRNA，其特征在于，所述的circRNA为circSETD2，其核苷酸序列如SEQIDNO：1所示。2.一种特异性扩增circSETD2的引物对，其特征在于，所述引物对的序列如SEQIDNO：2和SEQIDNO：3所示。3.权利要求1所述的circRNA在动物细胞和组织表达量检测中的应用。4.权利要求1所述的circRNA在公猪繁殖性能检测中的应用。5.权利要求2所述的引物对在细胞和组织表达量检测中的应用。6.权利要求2所述的引物对在公猪繁殖性能检测中的应用。7.权利要求1所述的circRNA在公猪的选择评定、配种以及遗传改良中的应用。8.权利要求2所述的引物对在公猪的选择评定、配种以及遗传改良中的应用。2CN110982910A说明书1/6页一种与公猪繁殖性状相关的circRNA及应用技术领域[0001]本发明属于家畜分子生物学技术领域，具体涉及一种与公猪繁殖性状相关的circRNA及应用。背景技术[0002]睾丸的发育影响精子的产生及各种雄性激素的分泌，进而影响公猪的繁殖性能，而公猪的初情期和性成熟期与睾丸发育密切相关，因此探究公猪的睾丸发育调控对种公猪的选育具有指导性作用(姜勋平；1998)。梅山公猪繁殖性能高，性成熟较早，与其他品系母猪杂交后代育肥效果较好，体格大，瘦肉率多，胴体重及饲料利用率高，适用于多品种猪群杂交的育肥改良(甘丽娜；2017)。杜洛克公猪瘦肉率高，增重快，性成熟较晚，一般为7～8月龄。二者在性成熟早晚的差异为种公猪的繁殖研究提供了良好模型。研究发现不同品种公猪睾丸中某些RNA分子存在差异性表达，其可能与公猪性成熟早晚有关。如120日龄达性成熟的二花脸公猪睾丸生长激素受体(GHR)表达量与240日龄达性成熟的大白公猪相比差异显著(p<0.05)，其通过特异性结合生长激素(GH)调节公猪繁殖性能(李发弟；2006)。因此研究不同猪种睾丸中某些RNA分子的表达模式，具有重要的现实意义。[0003]环状RNA(circRNA)是由RNA3’端与5’端共价连接形成的闭合环状非编码RNA分子，分布广泛、保守性强、结构稳定。随着高通量分子测序的快速发展，在动植物体真核细胞内发现大量的circRNA。研究表明circRNA参与基因的表达(Lietal；2015)、细胞的增殖分化(Lietal；2017)、癌症的发生及转移(Daietal；2017)等过程。circRNA具有时间及组织表达特异性，研究发现circRNA在猪妊娠中期脑皮质层中表达量显著增高，与猪胚胎脑部发育有关(Mortenetal；2015)。睾丸性别决定基因SRY的环状结构-circSRY通过吸附miR-138调节下游靶基因的表达(Hansenetal；2013)。目前circRNA在公猪繁殖方面研究还较少，因此寻找影响公猪繁殖性能的circRNAs成为当前公猪繁殖与遗传育种研究的新方向。[0004]公猪的繁殖过程涉及基因表达、表观遗传修饰(如DNA甲基化，组蛋白修饰等)等过程。研究表明组蛋白甲基转移酶SETD2调控精子发生、成熟等过程，敲除SETD2后组蛋白甲基转移酶缺失，精子发生基因ACRBP、PRM1表达量下降，造成精子发生异常、顶体畸形及不