核苷高产菌及其构建方法与应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112126666A(43)申请公布日2020.12.25(21)申请号202011005442.7C12N15/54(2006.01)(22)申请日2020.09.22C12N15/61(2006.01)C12R1/125(2006.01)(71)申请人廊坊梅花生物技术开发有限公司地址065001河北省廊坊市经济技术开发区华祥路66号(72)发明人孙莹莹胡丹白立宽吴涛(74)专利代理机构北京路浩知识产权代理有限公司11002代理人黄爽(51)Int.Cl.C12P19/40(2006.01)C12P19/38(2006.01)C12N9/10(2006.01)C12N9/90(2006.01)C12N1/21(2006.01)权利要求书1页说明书6页序列表9页附图1页(54)发明名称核苷高产菌及其构建方法与应用(57)摘要本发明提供核苷高产菌及其构建方法与应用。本发明还提供发酵生产核苷的方法，包括：(1)增强枯草芽孢杆菌如SEQIDNO:2所示的丝氨酸羟甲基转移酶基因glyA；和/或(2)弱化枯草芽孢杆菌染色体上编码NCBI参考序列WP_003228330.1的2,3‑双磷酸甘油酸非依赖性磷酸甘油酸突变酶基因pgm；以及(3)将步骤(1)和/或步骤(2)获得的菌株用于核苷的发酵生产。本发明提供的枯草芽孢杆菌工程菌为核苷高产菌株，能有效积累核苷，提高核苷的产量，为核苷的工业化生产奠定了基础。CN112126666ACN112126666A权利要求书1/1页1.发酵生产核苷的方法或提高核苷发酵产量的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)增强枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)如SEQIDNO:2所示的丝氨酸羟甲基转移酶基因glyA；和/或(2)弱化枯草芽孢杆菌染色体上编码NCBI参考序列WP_003228330.1的2,3-双磷酸甘油酸非依赖性磷酸甘油酸突变酶基因pgm；以及(3)将步骤(1)和/或步骤(2)获得的菌株用于核苷的发酵生产。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，通过点突变增强丝氨酸羟甲基转移酶基因glyA，使其编码的丝氨酸羟甲基转移酶的第146位谷氨酸突变为赖氨酸，导致该酶活性增强。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，通过点突变弱化2,3-双磷酸甘油酸非依赖性磷酸甘油酸突变酶基因pgm，使其编码的2,3-双磷酸甘油酸非依赖性磷酸甘油酸突变酶的第110位丙氨酸突变为缬氨酸，导致该酶活性降低。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌为B.subtilisA5。5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于，所述核苷选自腺苷、肌苷、鸟苷中的至少一种。6.核苷高产菌，其特征在于，所述工程菌是通过增强枯草芽孢杆菌如SEQIDNO:2所示的丝氨酸羟甲基转移酶基因glyA和/或弱化编码NCBI参考序列WP_003228330.1的2,3-双磷酸甘油酸非依赖性磷酸甘油酸突变酶基因pgm，获得的重组枯草芽孢杆菌；优选地，所述枯草芽孢杆菌为B.subtilisA5。7.根据权利要求6所述的核苷高产菌，其特征在于，通过点突变增强丝氨酸羟甲基转移酶基因glyA，使其编码的丝氨酸羟甲基转移酶的第146位谷氨酸突变为赖氨酸，导致该酶活性增强；和/或通过点突变弱化2,3-双磷酸甘油酸非依赖性磷酸甘油酸突变酶基因pgm，使其编码的2,3-双磷酸甘油酸非依赖性磷酸甘油酸突变酶的第110位丙氨酸突变为缬氨酸，导致该酶活性降低。8.核苷高产菌的构建方法，其特征在于，包括：利用基因工程手段增强枯草芽孢杆菌如SEQIDNO:2所示的丝氨酸羟甲基转移酶基因glyA和/或弱化编码NCBI参考序列WP_003228330.1的2,3-双磷酸甘油酸非依赖性磷酸甘油酸突变酶基因pgm，获得重组枯草芽孢杆菌；优选地，所述枯草芽孢杆菌为B.subtilisA5。9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，通过点突变增强丝氨酸羟甲基转移酶基因glyA，使其编码的丝氨酸羟甲基转移酶的第146位谷氨酸突变为赖氨酸，导致该酶活性增强；和/或通过点突变弱化2,3-双磷酸甘油酸非依赖性磷酸甘油酸突变酶基因pgm，使其编码的2,3-双磷酸甘油酸非依赖性磷酸甘油酸突变酶的第110位丙氨酸突变为缬氨酸，导致该酶活性降低。10.权利要求6或7所述的核苷高产菌或按照权利要求8或9所述方法构建的核苷高产菌在发酵生产核苷中的应用；所述核苷选自腺苷、肌苷、鸟苷中的至少一种。2CN112126666A说明书1/6页核苷高产菌及其构建方法与应用技术领域[0001]本发明涉及微生物领域和生物工程技术领域，具体地说，涉及核苷高产菌及其构建方法与应用。背景技术[0002]核苷是一类糖苷的总