一种金线莲的组培繁殖方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102907327A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102907327A(43)申请公布日2013.02.06(21)申请号201210442593.8(22)申请日2012.11.07(71)申请人厦门加晟生物科技有限公司地址361100福建省厦门市同安区新民大道109号(72)发明人方金镇郑志红方加强(74)专利代理机构厦门南强之路专利事务所35200代理人马应森(51)Int.Cl.A01H4/00(2006.01)权利要求书权利要求书22页页说明书说明书55页页(54)发明名称一种金线莲的组培繁殖方法(57)摘要一种金线莲的组培繁殖方法，涉及植物组织培养方法。提供能够快速促进金线莲茎段的快速繁殖并生长的一种金线莲的组培繁殖方法。取金线莲的茎段作为外植体材料，将外植体消毒；茎段不定芽的诱导；组培苗的培育；组培苗移栽。选用不含顶芽和长根的中间茎段作为培养对象，成活率高，不定芽增殖率高。在培养基中加入香蕉对促进幼苗生长非常有利，叶片净增量、发根数和鲜重净增量高。经过组培试验，增殖率可达5.7倍。CN102973ACN102907327A权利要求书1/2页1.一种金线莲的组培繁殖方法，其特征在于包括以下步骤：1）取金线莲的茎段作为外植体材料，将外植体消毒；2）茎段不定芽的诱导；3）组培苗的培育；4）组培苗移栽。2.如权利要求1所述的一种金线莲的组培繁殖方法，其特征在于在步骤1）中，所述金线莲选用野生金线莲。3.如权利要求1所述的一种金线莲的组培繁殖方法，其特征在于在步骤1）中，所述外植体为除去金线莲叶片后的野生金线莲茎段。4.如权利要求1所述的一种金线莲的组培繁殖方法，其特征在于在步骤1）中，所述外植体消毒的具体方法为：（1）将外植体置于流动水中冲洗；（2）对冲洗后的外植体浸润灭菌；（3）将步骤（2）浸润灭菌后的外植体放入HgCl溶液灭菌；（4）将步骤（3）处理后的外植体用无菌水进行涮洗。5.如权利要求4所述的一种金线莲的组培繁殖方法，其特征在于在步骤（1）中，所述冲洗的时间为1～3h；在步骤（2）中，所述灭菌在水平超净工作台内完成，外植体放置于已消毒的容器中并用酒精浸泡，所述浸泡的时间为10～30s；在步骤（3）中，所述HgCl溶液的质量分数为0.1%，所述灭菌的时间为5～20min；在步骤（4）中，所述涮洗的条件为涮洗5～10次，每次涮洗的时间为1～5min。6.如权利要求1所述的一种金线莲的组培繁殖方法，其特征在于在步骤2）中，所述茎段不定芽的诱导方法为：将已消毒的外植体茎段切成3段，分别接种于MS培养基上，茎段不定芽诱导后，转接到增殖培养基，培养后得到组培苗。7.如权利要求6所述的一种金线莲的组培繁殖方法，其特征在于所述切成3段是切成上段、中段和下段，所述上段切除茎尖，所述上段、中段和下段的长度可分别为0.5～1.0cm，所述上段、中段和下段最好每段均带有1～2个节间；所述培养的时间可为2～4个月。8.如权利要求6所述的一种金线莲的组培繁殖方法，其特征在于所述增殖培养基的组分为：MS培养基+细胞分裂素（6-苄氨基腺嘌呤,6-BA）0.1～0.5mg/L+激动素（6-糖基氨基嘌呤,KT）0.1～0.5mg/L+生长素（a-萘乙酸,NAA）0.1～0.5mg/L+吲哚丁酸(IBA)0.1～0.5mg/L+水解酪蛋白(CH)0.3～0.5g/L+香蕉50～80g/L+活性碳0.5～1.5g/L+蔗糖25～40g/L+琼脂6.5～8g/L；增殖培养基的pH可为：5.8～6。9.如权利要求1所述的一种金线莲的组培繁殖方法，其特征在于在步骤3）中，所述组培苗的培育方法为：将组培苗接种于生根培养基上，经过培育得到生根组培金线莲苗，培育的环境条件为：温度24±2℃，光照时间11h/d，光照强度900～2000lux，培育时间为2～3个月；所述生根培养基的组分为：1/2MS培养基+细胞分裂素（6-苄氨基腺嘌呤,6-BA）0.1～0.5mg/L+激动素（6-糖基氨基嘌呤,KT）0.1～0.5mg/L+生长素（a-萘乙酸,NAA）0.1～0.5mg/L+水解酪蛋白(CH)0.3～0.5g/L+香蕉100～120g/L+活性碳1～1.5g/L+蔗糖15～30g/L+琼脂6.5～8g/L；生根培养基的pH可为：5.8～6。2CN102907327A权利要求书2/2页10.如权利要求1所述的一种金线莲的组培繁殖方法，其特征在于在步骤4）中，所述组培苗移栽方法为：将生根组培金线莲苗移栽大棚，大棚的基质按质量比的原料组成为：泥炭土∶菜园土∶蛭石=2∶1∶1。3CN102907327A说明书1/5页一种金线莲的组培繁殖方法技术领域[0001]本发明涉及植物组织培养方法，尤其是涉及一种金线莲的组培快速