一种金线莲组织培养快速繁殖的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109042328A(43)申请公布日2018.12.21(21)申请号201811043235.3(22)申请日2018.09.07(71)申请人天津大学地址300072天津市南开区卫津路92号(72)发明人王洁华毛虹禹宋秋芳(74)专利代理机构天津一同创新知识产权代理事务所(普通合伙)12231代理人陆艺(51)Int.Cl.A01H4/00(2006.01)权利要求书1页说明书3页附图2页(54)发明名称一种金线莲组织培养快速繁殖的方法(57)摘要本发明公开了一种金线莲组织培养快速繁殖的方法，包括以下步骤：(1)将新鲜金线莲去叶的茎浸泡在多菌灵50％可湿性粉剂的水稀释液中，取出，冲洗；切茎段，用乙醇水溶液浸泡，无菌水冲洗，氯化汞水溶液中浸泡，取出，放无菌水中，在恒温摇床内摇动，无菌水冲洗；(2)接种到诱导培养基，诱导出小苗；(3)接种到增殖培养基，得到长出2-3片叶子的金线莲小植株；(4)切分成单株，接种到生根培养基，得到健壮成苗。本发明方法，使组织培养过程达到零污染，极大降低了金线莲组培过程的根腐问题；本发明可使诱导率和生根率达100％，增殖率可达4～6倍，繁殖周期三个月左右。成苗健壮，大大缩短了培养周期，提高了金线莲的产量及质量。CN109042328ACN109042328A权利要求书1/1页1.一种金线莲组织培养快速繁殖的方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)将新鲜金线莲去叶的茎浸泡在多菌灵50％可湿性粉剂的1200～1500质量倍水稀释液中6～8小时，取出，用自来水冲洗干净；置于超净工作台，切茎段，用体积浓度75％的乙醇水溶液浸泡消毒30～40s，取出，无菌水冲洗，再置于质量浓度0.1％的氯化汞水溶液中浸泡10～12min，取出，置于无菌水中，并放到恒温摇床内，恒温摇床的转速为80～100rpm，温度为24～26℃，摇动10-20min，再用无菌水冲洗4-6次；(2)将步骤(1)获得的外植体接种到诱导培养基，在24～26℃，光照强度500-1000lux，光照时间10h/d，培养，诱导出小苗；(3)将步骤(2)获得的小苗接种到增殖培养基，在24～26℃，光照强度500-1000lux，光照时间12h/d，培养，得到长出2-3片叶子的金线莲小植株；(4)将步骤(3)获得的小植株切分成单株，接种到生根培养基，在24～26℃，光照强度1000-2000lux，光照时间12h/d，培养，得到健壮成苗。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述诱导培养基的配方为：在MS培养基中加入萘乙酸，使终浓度为0.5mg/L，加入6-苄氨基腺嘌呤，使终浓度为3mg/L，加入蔗糖，使终浓度为30g/L，加入琼脂，使终浓度为6g/L，pH＝5.8。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述增殖培养基的配方为：在MS培养基中加入萘乙酸，使终浓度为0.5mg/L，加入6-苄氨基腺嘌呤，使终浓度为3mg/L，加入激动素，使终浓度为1mg/L，加入蔗糖，使终浓度为30g/L，加入琼脂，使终浓度为6g/L，pH＝5.8。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述生根培养基的配方为：在1/2MS培养基中加入萘乙酸，使终浓度为1mg/L，加入吲哚丁酸，使终浓度为1mg/L，加入蔗糖，使终浓度为30g/L，加入琼脂，使终浓度为4g/L，加入活性炭，使终浓度为5g/L，加入香蕉，使终浓度为50g/L，pH＝5.8。2CN109042328A说明书1/3页一种金线莲组织培养快速繁殖的方法技术领域[0001]本发明涉及一种金线莲(Anoectochilusroxburghii)组培快繁的方法，属于生物技术植物组织培养领域。背景技术[0002]金线莲，又称金线兰、金丝草，兰科开唇兰属植物，属多年生珍稀中草药植物。在民间具有广泛的药用价值，素有“药王”、“神草”等美称，主要分布在我国的福建、台湾、广西、广东等地，具有清热解毒、祛风利湿、滋阴润肺及降血压等功效，还可用于煲汤、茶饮中作为保健品食用。由于金线莲药用价值极高而且经济效益十分好，所以近年来金线莲的野生资源被疯狂采挖，资源日渐枯竭，而且金线莲种子自然萌发率和繁殖率极低，生长缓慢，所以急需利用生物技术组织培养对金线莲进行快速繁殖，保护濒危野生资源。目前，金线莲组培多以蒴果、茎段作为外植体，但在组培过程中，对于外植体的消毒效果不理想，污染率很高，而且蒴果种子发芽率很低，生长周期很长，并没有达到快速繁殖的目的。本发明以茎段为外植体，改良了消毒技术及培养基配方，做到培养过程零污染，有效快速地提高了金线莲种苗的繁殖速度和质量，可实现金线莲优质种苗的工厂化育苗，满足生产上的需要。发明内容[0003]本发明的目的是克服现有技术不足，提供一