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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106908562A(43)申请公布日2017.06.30(21)申请号201710272637.X(22)申请日2017.04.24(71)申请人武汉轻工大学地址430023湖北省武汉市东西湖区常青花园学府南路68号(72)发明人易阳王宏勋孙杰王丽梅闵婷侯温甫艾有伟(74)专利代理机构北京轻创知识产权代理有限公司11212代理人杨立陈振玉(51)Int.Cl.G01N30/88(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图2页(54)发明名称一种莲藕多糖HPSEC指纹图谱的构建方法(57)摘要本发明涉及一种莲藕多糖HPSEC指纹图谱的构建方法,其包括如下步骤:准备藕皮、食用部位和藕节三个供试部位并分别粉碎;将粉碎的三个供试部位分别进行多糖提取处理,得到多糖样品;对多糖样品分别进行检测,得到HPSEC-UV-RI二元图谱;多次重复得到多个不同品种莲藕的三个供试部位多糖的HPSEC-UV-RI二元图谱,进一步以平均向量构建得多糖HPSEC-UV-RI二元标准指纹图谱。优点在于,不同品种及不同部位莲藕多糖的HPSEC-RI指纹特征具有明显差异,能用于鉴别莲藕品种;HPSEC-UV指纹图谱可作为HPSEC-RI指纹图谱的补充,以更准确的对莲藕品种进行鉴别。CN106908562ACN106908562A权利要求书1/1页1.一种莲藕多糖HPSEC指纹图谱的构建方法,其特征在于,包括如下步骤:1)取莲藕洗净后切分为藕段和藕节,藕段刨取皮部得到藕皮和食用部位,藕节切除须根,将藕皮、食用部位和藕节三个供试部位分别粉碎至5~20目,待用;2)将步骤1)中粉碎的藕皮、食用部位和藕节三个供试部位分别进行多糖提取处理,分别得到相应的三份莲藕多糖样品;3)以步骤2)得到的三份莲藕多糖样品为测试对象,采用HPSEC检测多糖样品的分子量分布,检测时将UV检测器和RI检测器串联使用,得到藕皮、食用部位和藕节三个供试部位相应的多糖HPSEC-UV图谱和多糖HPSEC-RI图谱;4)多次重复步骤1)、2)和3)分别得到多个不同品种莲藕的藕皮、食用部位和藕节三个供试部位的多糖HPSEC-UV图谱和多糖HPSEC-RI图谱,以所有多糖HPSEC-UV图谱的平均向量构建得多糖HPSEC-UV标准指纹图谱,以所有多糖HPSEC-RI图谱的平均向量构建得多糖HPSEC-RI标准指纹图谱,则完成莲藕多糖HPSEC指纹图谱的构建。2.根据权利要求1所述的一种莲藕多糖HPSEC指纹图谱的构建方法,其特征在于,步骤2)中的多糖提取处理的具体内容为:将供试部位按料液比1g:15mL加入蒸馏水,在12000r/min的转速下均质处理5min后转入90℃水浴恒温浸提2h;浸提结束后,采用4500r/min离心10min,过滤分离多糖提取液;调节多糖提取液pH至6.5,加入α-淀粉酶在70℃水浴中酶解至碘液反应呈阴性,冷却至室温后调节至pH4.5,加入糖化酶在55℃水浴中酶解至还原糖含量不再增加,升温至95℃并保持10min灭酶;酶解提取液在70℃下真空浓缩至原体积1/4,采用Sevage法脱蛋白后加入无水乙醇至溶液中乙醇的体积浓度为80%,于4℃静置过夜;采用4500r/min离心10min分离沉淀多糖;多糖经体积浓度为80%乙醇洗涤后挥发乙醇,以少量水复溶后冷冻干燥得到莲藕多糖样品。3.根据权利要求1所述的一种莲藕多糖HPSEC指纹图谱的构建方法,其特征在于,步骤3)中HPSEC检测的具体条件为:色谱柱为Ultrahydrogel250,柱温为45℃,流动相为0.1mol/L硝酸钠,洗脱流速为0.5mL/min,进样体积为15μL,采用0.1mol/L硝酸钠配制2.5mg/mL的莲藕多糖样液,经0.45μm滤膜过滤后进样分析。4.根据权利要求1所述的一种莲藕多糖HPSEC指纹图谱的构建方法,其特征在于,所述多糖HPSEC-UV标准指纹图谱包括5个共有特征峰,其对应的保留时间依次为:12.55min、13.23min、13.53min、13.84min、15.39min。5.根据权利要求1所述的一种莲藕多糖HPSEC指纹图谱的构建方法,其特征在于,所述多糖HPSEC-UV标准指纹图谱包括7个共有特征峰,其对应的保留时间依次为:13.00min、13.82min、14.30min、15.07min、15.47min、15.90min、16.80min。6.根据权利要求1至5任一项所述的一种莲藕多糖HPSEC指纹图谱的构建方法,其特征在于,步骤4)中多个不同品种莲藕的数量为13个以上。2CN106908562A说明书1/6页一种莲藕多糖HPSEC指纹图谱的构建方法技术领域[0001]本发明属于农产品及其功能成