子莲的体外幼胚诱导和植株再生的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109302985A(43)申请公布日2019.02.05(21)申请号201811239455.3(22)申请日2018.10.23(71)申请人武汉市农业科学院地址430065湖北省武汉市洪山区白沙洲大道173号(72)发明人王芸刘玉平彭静柯卫东(74)专利代理机构武汉开元知识产权代理有限公司42104代理人俞鸿冯超(51)Int.Cl.A01H4/00(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图2页(54)发明名称子莲的体外幼胚诱导和植株再生的方法(57)摘要本发明公开了一种子莲的体外幼胚诱导和植株再生的方法，该方法首先将幼胚接种于莲胚培养基上暗培养3～4周，然后将诱导出的新生莲胚组织转接到莲胚培养基上进行继代培养，在温度为24～26℃条件下进行暗培养，再将继代良好的莲胚组织移至莲胚培养基上进行光照培养最后将生长状态良好且转绿的莲胚组织移至新的成苗培养基上培养，形成莲试管苗；本发明能够克服莲远缘杂交后代结实率低的问题，提高莲远缘杂交后代的存活率，在莲遗传改良和品种选育上有一定的应用价值。CN109302985ACN109302985A权利要求书1/1页1.一种子莲的体外幼胚诱导和植株再生的方法，其特征在于：包括以下步骤：1)接种幼胚：以子莲正常开花授粉后3～5天的籽粒为材料，经清洗消毒处理后，剥去外层表皮，切取幼胚接种于莲胚培养基上，在温度为24～26℃下进行暗培养3～4周，诱导得到新生莲胚组织；其中，莲胚培养基为MS基础培养基+4.0～6.0mg/LNAA+0.4～0.6mg/LZT+30.0g/L蔗糖+6.5g/L琼脂，pH值为5.8～6.0；2)继代培养：将诱导出的新生莲胚组织转接到莲胚培养基上进行继代培养，在温度为24～26℃条件下进行暗培养3～4周，使莲胚组织继续生长；3)光照培养：将继代良好的莲胚组织移至莲胚培养基上进行光照培养3～4周，光照度2000～2500lx，每天光照12h，直至莲胚组织转绿并出芽；4)诱导成苗：将生长状态良好且转绿的莲胚组织移至新的成苗培养基上培养1～2次，每次3～4周，光照度2000～2500lx，每天光照12h，直至形成莲试管苗，其中，成苗培养基为MS基础培养基+1.0～2.0mg/L6-BA+0.4～0.6mg/LZT+30.0g/L蔗糖+6.5g/L琼脂+0.5g/L活性炭，pH值为5.8～6.0。2.根据权利要求1所述子莲的体外幼胚诱导和植株再生的方法，其特征在于：所述步骤1)中，子莲的品种为鄂子莲1号。3.根据权利要求1所述子莲的体外幼胚诱导和植株再生的方法，其特征在于：所述步骤1)～3)中，莲胚培养基为MS基础培养基+5.0mg/LNAA+0.5mg/LZT+30.0g/L蔗糖+6.5g/L琼脂，pH为5.8。4.根据权利要求1所述子莲的体外幼胚诱导和植株再生的方法，其特征在于：所述步骤4)中，成苗培养基为MS基础培养基+1.5mg/L6-BA+0.5mg/LZT+30.0g/L蔗糖+6.5g/L琼脂+0.5g/L活性炭，pH为5.8。2CN109302985A说明书1/5页子莲的体外幼胚诱导和植株再生的方法技术领域[0001]本发明涉及植物组织培养领域，具体涉及一种子莲的体外幼胚诱导和植株再生的方法。背景技术[0002]莲(NelumbonuciferaGaertn.)属睡莲科(Nymphaeaceae)莲属(NelumboAdans)植物，是一种多年生水生蔬菜类作物。莲属植物包括中国莲(N.nuciferaGaertn.)和美洲黄莲(N.luteaPers.)两个种。中国是莲的起源中心之一，莲在我国有着悠久的栽培和驯化历史，中国古籍《诗经》中就有“山有扶苏，隰有荷华”、“彼泽之陂，有蒲与荷”的诗句。莲的栽培面积广泛，资源类型丰富，我国黄河以南及长江流域等地最适合莲的生长(孔庆东，中国水生蔬菜品种资源，湖北科学技术出版社，2004:3)。[0003]随着人类的长期驯化，莲逐渐分化为子莲、藕莲和花莲三个类型。藕莲和子莲可供人类食用，花莲可供观赏，另外莲的全株都可入药，有极高的药用价值，《本草纲目》记载“藕可交心肾，厚肠胃，固精气，强筋骨，补虚损，利耳目，除寒湿，止脾泄”(孔庆东，中国水生蔬菜品种资源，湖北科学技术出版社，2004:3)。近20年来，国内外在莲的园艺分类、生理生化、生长发育、组织培养及遗传育种等方面做了相关研究(王芸等，分子标记技术在莲遗传多样性分析中的应用，长江蔬菜，2009(16):8-10)，特别是国内人员在莲的组织培养上已做了许多工作，彭静等利用藕莲茎尖进行了莲的组织培养和快速繁殖研究，成功诱导分化丛芽及莲试管苗(彭静等，莲藕的组织培养与快速繁殖，植物生理学通讯，200