利用水角叶片为外植体的胚性愈伤组织诱导及植株再生和快繁的方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114885841A(43)申请公布日2022.08.12(21)申请号202210674833.0(22)申请日2022.06.14(71)申请人中国热带农业科学院热带生物技术研究所地址571101海南省海口市龙华区学院路4号(72)发明人谭德冠张家明付莉莉黄雨春马帅孙雪飘(74)专利代理机构武汉宇晨专利事务所(普通合伙)42001专利代理师张红兵(51)Int.Cl.A01H4/00(2006.01)权利要求书2页说明书7页附图3页(54)发明名称利用水角叶片为外植体的胚性愈伤组织诱导及植株再生和快繁的方法(57)摘要本发明属于植物细胞工程领域，涉及利用水角叶片为外植体的胚性愈伤组织诱导及植株再生和快繁的方法。以水角(Hydroceratriflora(L.)Wight.etArn)幼嫩叶片为外植体，通过诱导胚性愈伤组织途径建立水角植株再生和快繁体系。包括：外植体的选取与消毒、胚性愈伤组织诱导、不定芽诱导、不定芽增殖和再生植株生根。通过综合比较不同激素种类及组合等对胚性愈伤组织诱导率、不定芽诱导率及增殖系数和生长状态的影响，优选到水角诱导胚性愈伤组织、植株再生和快繁的系列培养基。本发明为遗传转化改良水角性状提供了基础，提高了水角不定芽的增殖效率，可用于水角组培苗的工厂化生产。CN114885841ACN114885841A权利要求书1/2页1.一种利用水角叶片为外植体的胚性愈伤组织诱导及植株再生和快繁的方法，其特征包括以下步骤：(1)外植体的选取与消毒于连续2个晴朗的天气取野外水角的幼嫩叶片，用自来水冲洗30分钟，滤纸吸干，再用70％酒精消毒20秒，再用有效氯≥40g/L的漂白水消毒5分钟，无菌水冲洗5遍，无菌滤纸吸干；(2)胚性愈伤组织的诱导将消毒好的水角叶片切成0.5厘米×0.5厘米方块，接种至胚性愈伤组织诱导培养基中，在黑暗条件下培养30天后，培养温度为25℃±2℃；从水角叶片中诱导出胚性愈伤组织；(3)不定芽的诱导将步骤(2)获得的胚性愈伤组织接到于不定芽诱导培养基中，在光照条件下培养30天后，使胚性愈伤组织分化出不定芽；培养温度为25℃±2℃；光照强度为2000lx；光周期为16h光照/8h黑暗；(4)不定芽的增殖培养将步骤(3)的不定芽连同愈伤组织块一起转移至新的不定芽诱导培养基中，在光照条件下培养15天后，使之形成丛生芽；将水角丛生芽切割成含3‑5个不定芽的小块，接种至不定芽增殖培养基中，在光照条件下培养15天后，得到增殖的不定芽；培养温度为25℃±2℃；光照强度为2000lx；光周期为16h光照/8h黑暗；(5)不定芽的生根培养将步骤(4)所得的健壮不定芽切下，接种至生根培养基中培养培养25‑30天，培养温度为25℃±2℃；光照强度为2000lx；光周期为16h光照/8h黑暗；其中：上述培养基成分及其配比如下：叶片胚性愈伤组织诱导培养基：MS，附加NAA2mg/L，6‑BA0.1mg/L，蔗糖30g/L，琼脂粉8g/L；补充蒸馏水至1L；灭菌前调培养基的pH至5.8‑6.2；不定芽诱导培养基：MS，附加6‑BA5mg/L，NAA0.1mg/L，蔗糖30g/L，琼脂粉8g/L；补充蒸馏水至1L；灭菌前调培养基的pH至5.8‑6.2；不定芽增殖培养基：MS，附加6‑BA3mg/L，NAA0.1mg/L，蔗糖30g/L；补充蒸馏水至1L；灭菌前调培养基的pH至5.8‑6.2；生根培养基：MS，附加NAA0.5mg/L，蔗糖30g/L，琼脂粉8g/L；补充蒸馏水至1L；灭菌前调培养基的pH至5.8‑6.2。2.一种利用水角叶片为外植体的胚性愈伤组织诱导及植株再生和快繁的方法的专用培养基，其特征在于，所述专用培养基的配方为：叶片胚性愈伤组织诱导培养基：MS，附加NAA2mg/L，6‑BA0.1mg/L，蔗糖30g/L，琼脂粉8g/L；补充蒸馏水至1L；灭菌前调培养基的pH至5.8‑6.2；不定芽诱导培养基：MS，附加6‑BA5mg/L，NAA0.1mg/L，蔗糖30g/L，琼脂粉8g/L；补充蒸馏水至1L；灭菌前调培养基的pH至5.8‑6.2；不定芽增殖培养基：MS，附加6‑BA3mg/L，NAA0.1mg/L，蔗糖30g/L；补充蒸馏水至1L；灭菌前调培养基的pH至5.8‑6.2；2CN114885841A权利要求书2/2页生根培养基：MS，附加NAA0.5mg/L,蔗糖30g/L，琼脂粉8g/L；补充蒸馏水至1L；灭菌前调培养基的pH至5.8‑6.2。3CN114885841A说明书1/7页利用水角叶片为外植体的胚性愈伤组织诱导及植株再生和快繁的方法技术领域[0001]本发明涉及植物细胞工程技术领域，具体涉及利用水角叶片为外植体的胚性愈伤组织诱导及植