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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110089427A(43)申请公布日2019.08.06(21)申请号201910280554.4(22)申请日2019.04.09(71)申请人福建省农业科学院作物研究所地址350000福建省福州市郊新店埔党(72)发明人叶秀仙樊荣辉陈艺荃钟淮钦林榕燕(74)专利代理机构福州市鼓楼区京华专利事务所(普通合伙)35212代理人林云娇(51)Int.Cl.A01H4/00(2006.01)权利要求书2页说明书5页(54)发明名称一种金线莲种质资源的离体保存方法(57)摘要本发明提供了一种金线莲种质资源的离体保存方法,包括以下步骤:外植体的选择和消毒、丛生芽的诱导与增殖、缓慢生长保存种质、保存后恢复再生培养和生根移栽。本发明具有操作简便、保存成本低,实用性强等优点,保存的种质恢复再生能力强、移栽成活率高,能较好地保持种质的优良特性;克服了现有技术中金线莲保存技术操作过程较为繁复、成本高、保存苗恢复再生能力差,移栽成活率低的缺陷。CN110089427ACN110089427A权利要求书1/2页1.一种金线莲种质资源的离体保存方法,其特征在于:包括以下步骤:(1)外植体的选择与消毒:选择健康、无病虫害的金线莲母株为外植体,去除叶片、根系,留下茎段,先用2~3g/L的洗洁精溶液浸泡3~5min,再用自来水冲洗干净,然后将外植体放入无菌容器中,先用75%的酒精浸泡60s,接着转入0.1%升汞溶液中进行摇床振荡消毒6~8min,取出并用无菌水冲洗3~5次,再用无菌纸巾吸干水分,切取带节茎段,备用;(2)丛生芽诱导与增殖:取所述带节茎段,并接种到A培养基中进行初代培养,培养30~45d后诱导获得丛生芽;更换A培养基进行继代增殖培养35~40d,增殖2~3代后获得芽大小为0.5~0.8cm的丛生芽;(3)缓慢生长保存种质:将所述丛生芽切割成单芽,接种到B培养基中进行缓慢生长保存18~24个月;(4)保存后恢复再生培养:将(3)保存后的材料切取带节茎段和茎尖接种到A培养基中进行恢复培养45~50d,获得小芽可继续进行缓慢生长保存或生根培养及移栽种植。2.如权利要求1所述的一种金线莲种质资源的离体保存方法,其特征在于:还包括步骤(5):生根移栽:将(4)获得的小芽切割成单芽,并接种于C培养基上进行培养,生根培养70~80d获得健壮生根苗,即可进行移栽种植。3.如权利要求1所述的一种金线莲种质资源的离体保存方法,其特征在于:所述A培养基的组分为:KNO32000mg/L、(NH4)2SO4270mg/L、NaH2PO4.2H2O340mg/L、MgSO4·7H2O500mg/L、CaCl2·2H2O300mg/L、MnSO4·H2O10.0mg/L、ZnSO4·7H2O2.0mg/L、H3BO33.0mg/L、KI0.75mg/L、Na2MoO2·2H2O0.25mg/L、CoCl2·6H2O0.025mg/L、CuSO4·5H2O0.025mg/L、FeSO4·7H2O27.8mg/L、Na2·EDTA37.3mg/L、盐酸硫胺素(VB1)8.0~10.0mg/L、烟酸(VB5)1.0~2.0mg/L、盐酸吡哆醇(VB6)1.0mg/L、甘氨酸2.0mg/L、肌醇100~150mg/L、(水解乳蛋白)LH0.5~0.8g/L、白糖25.0~35.0g/L、凝固剂6.0~6.5g/L、6-苄氨基嘌呤(6-BA)1.0~2.0mg/L、及吲哚丁酸(IBA)0.1~0.2mg/L;B培养基的组分为:花宝1号1.0~1.2g/L、KNO31000mg/L、(NH4)2SO4270mg/L、NaH2PO4.2H2O340mg/L、MgSO4·7H2O250mg/L、CaCl2·2H2O150~300mg/L、MnSO4·H2O10.0mg/L、ZnSO4·7H2O2.0mg/L、H3BO33.0mg/L、KI0.75mg/L、Na2MoO2·2H2O0.25mg/L、CoCl2·6H2O0.025mg/L、CuSO4·5H2O0.025mg/L、FeSO4·7H2O27.8mg/L、Na2·EDTA37.3mg/L、盐酸硫胺素(VB1)0.5~0.8mg/L、烟酸(VB5)1.0mg/L、盐酸吡哆醇(VB6)1.0mg/L、甘氨酸2.0mg/L、肌醇100mg/L、甘露醇10.0~20.0g/L、白糖10.0~20.0g/L、凝固剂6.8~7.3g/L;C培养基的组分为:花宝1号1.3~1.5g/L、KNO3900~950mg/L、NH4NO3825~850mg/L、KH2PO488~100mg/L、MgSO4·7H2O200~250mg/L、CaCl2·2H2O220~330