一种广西金线莲种质资源组培苗的脱毒方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107593440A(43)申请公布日2018.01.19(21)申请号201710958955.1(22)申请日2017.10.16(71)申请人李操地址546899广西壮族自治区贺州市昭平县昭平镇西宁中路37号(72)发明人李操(74)专利代理机构广州市越秀区海心联合专利代理事务所(普通合伙)44295代理人蔡国马赟斋(51)Int.Cl.A01H4/00(2006.01)权利要求书2页说明书5页(54)发明名称一种广西金线莲种质资源组培苗的脱毒方法(57)摘要本发明提供一种广西金线莲种质资源组培苗的脱毒方法，包括以下步骤：(1)采集野生金线莲作为种苗；(2)对种苗进行初步高温钝化；(3)切去种苗的带2个节的带叶茎段后进行二次高温钝化；(4)取茎尖或茎段进行灭菌处理，然后切取部分茎尖或茎段作为外植体进行初代培养；(5)待外植体出现白色生长点时，切取白色生长点并转入初代培养基中进行初代培养；(6)待白色生长点长大成丛生芽后，转入继代培养基中进行继代培养；(7)待丛生芽增殖并长大成苗株且株高达5-6cm时，转入诱导生根培养基中进行诱导生根，获得试管苗；(8)试管苗移至室外进行炼苗，获得合格的脱毒试管苗；(9)移植至室外环境下种植。该方法能有效地避免组培苗感染病毒，为大规模种植提供可靠保障。CN107593440ACN107593440A权利要求书1/2页1.一种广西金线莲种质资源组培苗的脱毒方法，其特征是，包括以下步骤：(1)采集野生金线莲，作为种苗；(2)将所述的种苗置于烧杯中并加清水至浸没种苗根部，然后置于35-41℃的恒温箱中进行初步高温钝化；(3)切去种苗的带2个节的带叶茎段，然后进行对种苗进行清洗及灭菌处理，之后置于恒温箱中在37-42℃温度下进行二次高温钝化；(4)于无菌工作台中取所述种苗茎尖或茎段进行灭菌处理，然后切取部分茎尖或茎段作为外植体转入初代培养基中进行初代培养；(5)待所述外植体出现白色生长点时，切取白色生长点并转入初代培养基中进行初代培养；(6)待所述白色生长点长大成丛生芽后，转入继代培养基中进行继代培养；(7)待所述丛生芽增殖并长大成苗株且株高达5-6cm时，转入诱导生根培养基中进行诱导生根，获得试管苗；(8)所述试管苗移至室外进行炼苗，获得合格的脱毒试管苗；(9)将所述脱毒试管苗移植至室外环境下种植。2.根据权利要求1所述广西金线莲种质资源组培苗的脱毒方法，其特征是，所述步骤(1)中，在每年10-11月进行野生金线莲采集。3.根据权利要求1所述广西金线莲种质资源组培苗的脱毒方法，其特征是，所述步骤(2)中，所述初步高温钝化时间为72-96h，在处理过程中需要定时观察，及时添加清水，避免种苗被烘干。4.根据权利要求1所述广西金线莲种质资源组培苗的脱毒方法，其特征是，所述步骤(3)中，采用灭菌洗衣粉溶液对种苗进行清洗及灭菌处理，其中所述灭菌洗衣粉溶液需浸没种苗，并振荡1-2min及静置1-2h，之后取出清洗干净再进行二次高温钝化；所述二次高温钝化时间为3-4h。5.根据权利要求1所述广西金线莲种质资源组培苗的脱毒方法，其特征是，所述步骤(4)和(5)的初代培养基在MS培养基的基础上含有以下成分：2.0-4.0mg/L6-BA+0.4-1.0mg/LZT+0.5-1.5mg/LNAA+3.0-4.0％蔗糖+0.57-0.6％琼脂，pH5.5-5.8。6.根据权利要求1所述广西金线莲种质资源组培苗的脱毒方法，其特征是，所述步骤(6)的继代培养基在MS培养基的基础上含有以下成分：1.5-3.5mg/L6-BA+0.3-0.8mg/LZT+0.4-1.0mg/LNAA+3.0-4.0％蔗糖+0.57-0.6％琼脂，pH5.5-5.8。7.根据权利要求1所述广西金线莲种质资源组培苗的脱毒方法，其特征是，所述步骤(6)的诱导生根培养基在1/2MS培养基的基础上含有以下成分：1.0-2.0mg/L6-BA+0.1-0.3mg/LZT+0.1-0.5mg/LIBA+3.0-4.0％蔗糖+0.57-0.6％琼脂，pH5.5-5.8。8.根据权利要求1-7任一项所述广西金线莲种质资源组培苗的脱毒方法，其特征是，所述步骤(4)和(5)的初代培养、步骤(6)的继代培养和步骤(7)的诱导生根培养都在培养室中进行，培养条件为：温度23-28℃，光照2200-2800Lux，相对湿度80-85％。2CN107593440A权利要求书2/2页9.根据权利要求1所述广西金线莲种质资源组培苗的脱毒方法，其特征是，所述步骤(6)中，继代培养应不超过10代。10.根据权利要求1所述广西金线莲种质资源组培苗的脱毒方法，其特征是，所述步骤(8)的炼苗过程中，将苗株连同