一种多杀霉素提取方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113416225A(43)申请公布日2021.09.21(21)申请号202110746832.8(22)申请日2021.07.02(71)申请人联邦制药(内蒙古)有限公司地址015000内蒙古自治区巴彦淖尔市经济技术开发区(72)发明人花远志徐良平罗斌华峰(74)专利代理机构上海伯瑞杰知识产权代理有限公司31227代理人王晓丽(51)Int.Cl.C07H17/08(2006.01)C07H1/06(2006.01)权利要求书2页说明书11页(54)发明名称一种多杀霉素提取方法(57)摘要本发明公开了一多杀霉素提取方法，包括以下步骤：萃取、反萃取、碱结晶萃取、脱色、二次反萃取、二次碱结晶、醇结晶和干燥；采用的工艺取消了传统工艺中板框过滤、菌渣干燥、菌渣浸提等步骤，不仅简化了设备，还缩短了生产周期，同时避免了菌渣浸提过程中对环境造成新的污染；同时给出了最佳的多杀霉素产品量与油酸甲酯的料液比，多杀霉素产品量与柠檬酸或酒石酸溶液的料液比和多杀霉素产品量与乙醇的料液比，在降低油酸甲酯，柠檬酸或酒石酸和乙醇的使用量的同时，提高了多杀菌素的收率，各步骤的多杀霉素提取的收率均＞92%，且多杀霉素的提取总收率≥88％，为实现大规模工业化生产奠定了基础。CN113416225ACN113416225A权利要求书1/2页1.一种多杀霉素提取方法，其特征在于，包括以下步骤：萃取：按照发酵液中多杀霉素产品量与油酸甲酯料液比为10～30:1（g:L）,缓慢加入油酸甲酯，同时不断搅拌，搅拌时间为2～6h，随后静置30～60min，分层后进行有机相和水相分离，将有机相转入反萃取罐；反萃取：以步骤（1）所得有机相中多杀霉素产品量与柠檬酸或酒石酸溶液的料液比为10～30:1（g:L），向步骤（1）所得的有机相中加入柠檬酸或酒石酸溶液进行反萃取，直到反萃取罐内的pH值为2.0～4.0时，停止加入柠檬酸或酒石酸溶液，随后静置分层或离心分层，控制有机相效价在1g/L以下，将水相收集在碱结晶罐中，结晶后得到粗粉；碱结晶萃取：向碱结晶罐中缓慢加入碱液，直到pH值为9.0～11.0时，停止加入碱液，随后向碱结晶罐加入有机溶剂，碱结晶罐内多杀霉素产品量与有机溶剂的料液比为15～30：1（g:L），搅拌使得步骤（2）所得粗粉完全溶解，控制水相效价在1g/L以下，随后静置分层或离心分层，将有机相转入脱色罐；脱色：向脱色罐内加入活性炭，活性炭的加入量为步骤（3）所得有机相中多杀霉素产品量质量的5～15%，搅拌5～20min后进行过滤；二次反萃取：向步骤（4）所得过滤液加入柠檬酸或酒石酸进行反萃取，步骤（4）所得过滤液中多杀霉素产品量与柠檬酸或酒石酸溶液的料液比为10～30:1（g:L），当pH值为2.0～4.0时，停止加入柠檬酸或酒石酸，随后静置分层或离心分层，控制有机相效价在1g/L以下，将水相收集在二次碱结晶罐中；二次碱结晶：将1.0～3.0M碱液缓慢加入二次碱结晶罐内进行碱结晶，当pH值为9.0～11.0时停止加入碱液，结晶结束后过滤分离得到湿粉；醇结晶和干燥：向步骤（6）所得湿粉加入乙醇，控制步骤（6）所得湿粉与乙醇的料液比为80～120：1（g:L），并不断搅拌，同时进行加热使得温度达到50～70℃，当步骤（6）所得湿粉完全溶解后，加入超纯水至溶液变浑浊，停止加水，自然冷却至20～30℃后继续搅拌25～35min，随后过滤，用40%的乙醇对过滤所得物顶洗一次，将收集到的湿晶体在50～70℃进行真空干燥。2.根据权利要求1所述的一种多杀霉素提取方法，其特征在于：所述步骤（1）‑（5）中：所述多杀霉素产品量是由溶液体积（L）与多杀霉素的浓度（g/L）相乘计算所得。3.根据权利要求1或2所述的一种多杀霉素提取方法，其特征在于：所述步骤（1）中：多杀霉素产品量与油酸甲酯料的液比为15～20:1（g:L），优选料液比为19:1（g:L）；所述搅拌时间为3～4h，优选3.5h；所述静置时间为40min。4.根据权利要求1～3任一项所述的一种多杀霉素提取方法，其特征在于：所述步骤（2）中：以步骤（1）所得有机相中多杀霉素产品量与柠檬酸或酒石酸溶液的料液比为15～20:1（g:L），优选料液比为19:1（g:L）；所述柠檬酸或酒石酸溶液的浓度为0.2～0.5M；所述PH值为3.0。5.根据权利要求1～4任一项所述的一种多杀霉素提取方法，其特征在于：所述步骤（3）中：所述碱液为氢氧化钠或氨水；所述碱液的浓度为1.0～3.0M；所述有机溶剂为正庚烷或乙酸异丙酯或乙酸丁酯或乙酸乙酯，优选正庚烷或乙酸丁酯；所述pH值为9.5～10.0，优选pH值为9.8。2CN113416225A权利要求书2/2页6.根据权利要