一种氧氟沙星检测方法及试剂盒.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106771142A(43)申请公布日2017.05.31(21)申请号201611079691.4(22)申请日2016.11.30(71)申请人百奥森（江苏）食品安全科技有限公司地址214070江苏省无锡市滴翠路100号创意园三期A幢303(72)发明人周合张根义张进周朱晨杨敏胡彬吴念绮(51)Int.Cl.G01N33/543(2006.01)G01N33/577(2006.01)G01N33/535(2006.01)G01N21/76(2006.01)权利要求书1页说明书3页(54)发明名称一种氧氟沙星检测方法及试剂盒(57)摘要本发明公开了一种氧氟沙星检测方法及试剂盒，包含以下步骤，A、样品的处理：将待测样品进行前处理，加入提取剂后进行匀浆，匀浆之后进行超声提取，之后进行第一次离心分离得到上清液，用氮气将上清液吹干后得到的残余物用初始流动相溶解；B、氧氟沙星的测定：将步骤A得到的样品通过检测试剂盒进行测定。本发明的氧氟沙星检测方法及检测试剂盒具有灵敏度高、简便快速、准确的特点，与传统的比色ELISA法比较，灵敏度可以提高一个数量级。能够在动物性食品(如水产品、动物组织、蜂蜜)中的氧氟沙星药物残留检测中发挥重要作用。CN106771142ACN106771142A权利要求书1/1页1.一种氧氟沙星检测方法，其特征在于，包含以下步骤，A、样品的处理：将待测样品进行前处理，加入提取剂后进行匀浆，匀浆之后进行超声提取，之后进行第一次离心分离得到上清液，用氮气将上清液吹干后得到的残余物用初始流动相溶解，混匀，之后进行第二次离心分离得到上清液，取上清液进行微孔滤膜过滤得到的滤液用于UPLC-MS/MS测定；B、氧氟沙星的测定：将步骤A得到的样品通过检测试剂盒进行测定。2.一种氧氟沙星检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包括盒体以及设在盒体内的酶标板和设在盒体内的试剂，所述酶标板的各孔包被有以氧氟沙星衍生物与卵清蛋白偶联制成的包被抗原；所述试剂包括：喹诺酮类单克隆抗体、辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠抗体、喹诺酮类系列标准溶液、浓缩磷酸盐缓冲液、浓缩洗涤液、化学发光液。3.根据权利要求2所述的一种氧氟沙星检测方法及试剂盒，其特征在于，所述酶标板为乳白色不透明聚苯乙烯96孔化学发光酶标板。4.根据权利要求3所述的一种氧氟沙星检测方法及试剂盒，其特征在于，所述包被抗原浓度为20μg/mL。5.根据权利要求2所述的一种氧氟沙星检测方法及试剂盒，其特征在于，所述喹诺酮类的单克隆抗体是由氧氟沙星衍生物与牛血清蛋白偶合制成的偶联物作为免疫原免疫Balb/c小鼠制备获得。6.根据权利要求2所述的一种氧氟沙星检测方法及试剂盒，其特征在于，所述喹诺酮类系列标准溶液浓度分别为：0ng/mL，0.1ng/mL，0.3ng/mL，0.9ng/mL，2.7ng/mL和8.1ng/mL。7.根据权利要求2所述的一种氧氟沙星检测方法及试剂盒，其特征在于，所述浓缩磷酸盐缓冲液是每升含NaH2PO4·2H2O5.74g、Na2HPO4·12H2O32.6g的水溶液。8.一种氧氟沙星检测方法及试剂盒的制备方法，其特征在于，所述浓缩洗涤溶液是含有体积分数0.05％吐温-20的pH＝7.4，0.1mol/L磷酸盐缓冲液。9.一种氧氟沙星检测方法及试剂盒的制备方法，其特征在于，所述化学发光液A液为鲁米诺含量为0.01M、对甲苯酚含量为0.001MpH＝8.8的三(羟甲基)氨基甲烷溶液；B液为100mL溶液含柠檬酸2.1g，无水Na2HPO42.82g，0.75％的过氧化氢脲0.64mL的溶液，所述百分比为质量百分比。2CN106771142A说明书1/3页一种氧氟沙星检测方法及试剂盒技术领域[0001]本发明涉及一种检测技术，具体是一种氧氟沙星检测方法及试剂盒。背景技术[0002]氧氟沙星是一种广谱高效抗菌药物，在临床上的应用相当广泛。氧氟沙星抗生素对大多数革兰氏阳性菌、大肠杆菌、绿脓杆菌有非常好的抑制活性;对葡萄球菌、衣原体、分支杆菌、支原体和尿属支原体有中等强度的抑制活性;对链球菌(尤其是D族链球菌)、肠球菌及厌氧菌有很小或无抑制活性。随着该类药物的广泛应用及深入研究，有关氧氟沙星药物的不良反应和耐药性报道越来越多，其潜在的严重不良反应逐渐受到人们的重视，作为兽药和饲料添加剂而大量的用于动物，因而其残留在动物可食性产品中的可能性相对很大。这些残留物可直接对人造成危害外，更严重的是低浓度的残留药物可能对氧氟沙星药物敏感的致病菌产生耐药性，从而间接危害人类健康。为保护人类健康，控制氧氟沙星抗生素的残留，美国FDA规定沙星类在食物中的残留量小于100卿比，我国规定的氟诺哇酮在牛奶中的残留量应小于1OO