一种蜂蜜基质中磺胺类抗生素的快速筛查方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106814154A(43)申请公布日2017.06.09(21)申请号201710117486.0(22)申请日2017.03.01(66)本国优先权数据201610210050.12016.04.06CN(71)申请人中国计量科学研究院地址100029北京市朝阳区北三环东路18号(72)发明人李秀琴张庆合许森李红梅(74)专利代理机构北京正鼎专利代理事务所(普通合伙)11495代理人岳亚(51)Int.Cl.G01N30/06(2006.01)G01N30/88(2006.01)权利要求书1页说明书4页附图2页(54)发明名称一种蜂蜜基质中磺胺类抗生素的快速筛查方法(57)摘要本发明公开了一种蜂蜜基质中磺胺类抗生素的快速筛查方法，包括：称取待测蜂蜜样品，加入同位素内标平衡后，加入盐酸溶液进行酸解；用氢氧化钠溶液调节PH值至4.5；加入乙腈、二氯甲烷和氯化钠后振荡，离心，移取上层清液至一次性离心管；氮气吹干，乙腈复溶，过GPH滤膜，得到待测样品溶液；使用移液枪定量滴加所述待测样品溶液在DIP-it管上；采用实时直接分析质谱离子源DART-MS/MS对所述待测样品溶液进行检测。本发明实施例的方案，能够实现快速准确的对蜂蜜基质中磺胺类抗生素的筛查检测。CN106814154ACN106814154A权利要求书1/1页1.一种蜂蜜基质中磺胺类抗生素的快速筛查方法，其特征在于，包括：(1)称取待测蜂蜜样品适量，加入适量同位素标记物，60℃水浴加热搅拌；(2)加入盐酸酸解溶液，涡旋至蜂蜜完全溶解；(3)用氢氧化钠溶液调节PH值至4.5；(4)加入乙腈、二氯甲烷和氯化钠后振荡，离心，移取上层清液至一次性离心管；(5)45℃水浴氮气吹干，用乙腈复溶，过GPH滤膜，得到待测样品溶液；(6)定量滴加所述待测样品溶液在DIP-it管上；(7)采用实时直接分析质谱离子源DART-MS/MS对所述待测样品溶液进行检测。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括：加入同位素内标后，60℃水浴加热搅拌2小时。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括：加入盐酸酸解溶液，浓度为2mol/L，酸解温度为25℃，酸解时间为2小时。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述加入乙腈、二氯甲烷和氯化钠后振荡，离心，移取上层清液至一次性离心管，还包括：加入10mL乙腈，2.5mL二氯甲烷和0.5g氯化钠后振荡10min，以5000rpm的速率离心5min，移取上层清液10mL于15mL一次性离心管。5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括：使用移液器定量滴加5μL所述待测样品溶液在DIP-it管上。6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括:设置实时直接分析质谱离子源DART-MS/MS参数：正离子采集，多反应监测(MRM)模式，载气为氦气，载气温度350℃，样品传输速度0.6mm/s。2CN106814154A说明书1/4页一种蜂蜜基质中磺胺类抗生素的快速筛查方法技术领域[0001]本发明涉及食品中抗生素筛查技术领域，特别涉及一种蜂蜜基质中磺胺类抗生素的快速筛查方法。背景技术[0002]磺胺类(sulfonamides)药物是指具有对氨基苯磺酰胺结构的一类药物的总称,主要用于预防和治疗细菌感染性疾病。由于其广谱高效的抗菌性,目前被广泛应用于畜牧和水产养殖生产。用于养蜂业中可以防治蜂病、降低蜜蜂死亡率、提高蜜蜂生产性能,但是由于其在动物体内代谢降解缓慢,如果不遵守休药期规定、超量使用,易造成蜂产品中磺胺类药物残留。常用的磺胺类抗生素的名称见表1。[0003]表1[0004][0005]我国国家安全标准GB14963-2011中要求蜂蜜中兽药残留限量应符合相关标准的规定。相关标准规定包括:1.卫生部在2011年4月发布了《食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂名单》中指出蜂蜜中可能添加了磺胺类抗生素。2.无公害蜂蜜(NY5134-2008)中对抗生素的安全指标是四环素族抗生素≤0.5mg/kg，磺胺类抗生素类≤0.05mg/kg，其他兽药限量应符合国家有关规定。[0006]目前食品安全问题越来越受到人们的关注,准确、灵敏、高效的检测技术已成为一种发展趋势,文献报道的蜂蜜中磺胺类化合物的检测方法有气相色谱法,酶联免疫法,液相色谱紫外或荧光检测法,液相色谱-质谱联用法等。气相色谱法需要进行样品的衍生化处理,操作比较繁琐；酶联免疫法虽然简便快速,但是往往回收率,准确度有一定的欠缺；液相色谱紫外或荧光检测虽可以达到较好的分离,但是为实现杂质分离,需要较多时间,而且紫外法检测灵敏度低,荧光法一般也需要衍生化处理。液相色谱-质谱联用技术其