一种蜂蜜基质中氯霉素的快速筛查方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN105865885A(43)申请公布日2016.08.17(21)申请号201610210048.4(22)申请日2016.04.06(71)申请人中国计量科学研究院地址100029北京市朝阳区北三环东路18号(72)发明人李秀琴张庆合许森李红梅(51)Int.Cl.G01N1/34(2006.01)G01N27/62(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图1页(54)发明名称一种蜂蜜基质中氯霉素的快速筛查方法(57)摘要本发明公开了一种蜂蜜基质中氯霉素的快速筛查方法，包括：称取待测蜂蜜样品，加入去离子水，经加热水浴后涡旋至蜂蜜完全溶解；添加乙酸乙酯后震荡提取并离心操作，移取上层清液至离心管；重复用水反萃一次，得到样品上清液；将所述样品上清液水浴后，氮气吹干，用乙腈复溶，得到待测样品溶液；使用移液器定量滴加所述待测样品溶液在Dip-it管上；采用实时直接分析质谱离子源DART-MS/MS对所述待测样品溶液进行检测。本发明实施例的方案，能够实现快速准确的对蜂蜜基质中氯霉素的筛查检测。CN105865885ACN105865885A权利要求书1/1页1.一种蜂蜜基质中氯霉素的快速筛查方法，其特征在于，包括：称取待测蜂蜜样品，加入去离子水，经加热水浴后涡旋至蜂蜜完全溶解；添加乙酸乙酯后震荡提取并离心操作，移取上层清液至离心管；重复用水反萃一次，得到样品上清液；水浴氮气吹干样品，残渣用乙腈复溶，得到待测样品溶液；定量滴加所述待测样品溶液在Dip-it管上；采用实时直接分析质谱离子源DART-MS/MS对所述待测样品溶液进行检测。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括：所述加热水浴为60℃水浴。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括：所述用水反萃为：在上清液中加入5mL去离子水，振荡10min，3000rpm离心5min，取上清液。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法中前处理过程具体包括：称取5g蜂蜜样品于50mL一次性离心管，加入5mL去离子水，经60℃水浴后涡旋至蜂蜜完全溶解；添加15mL乙酸乙酯后振荡提取10min，以3000rpm的速率离心5min，移取上层清液至15mL离心管；在上清液中加入5mL去离子水，振荡10min，3000rpm离心5min，取上清液；重复用水反萃一次，取上清液10mL；45℃水浴，氮气吹干上清液后用2mL乙腈复溶。5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述方法还包括：移液器定量滴加5μL所述待测样品溶液在Dip-it管上。6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括：设置实时直接分析质谱离子源DART-MS/MS参数：负离子采集，多反应监测(MRM)模式，载气为氦气，载气温度550℃，样品传输速度0.6mm/s。2CN105865885A说明书1/5页一种蜂蜜基质中氯霉素的快速筛查方法技术领域[0001]本发明涉及食品中抗生素筛查技术领域，特别涉及一种蜂蜜基质中氯霉素的快速筛查方法。背景技术[0002]蜂业养殖过程中，蜜蜂经常患腐臭病、螺原体病等细菌性疾病，这些疾病会对养蜂生产和蜂产品安全构成严重威胁。为了防治蜜蜂疾病，各种抗生素类药物被蜂农频繁使用，甚至会在效果不佳时加大剂量，因此导致了蜂蜜中抗生素残留。2002年欧盟等国家禁运我国蜂蜜事件后，欧盟理事会通过《关于对产自中国的进口动物产品实行某些保护性措施的决议》(2002/69/EC)，将氯霉素残留限量改为0.1μg/kg。在2005年欧盟解禁中国蜂蜜后，但从中国进口的动物源食品的保护措施2005/573/EC决议中指出，中国出口的蜂蜜必须附加氯霉素和硝基呋喃及其代谢物等残留检验报告(2005/573/EC)。2009年12月欧盟委员会条例(EU)No.37/2010中指出蜂蜜中氯霉素、硝基呋喃等为禁用药理活性物质，其他抗生素为非法使用药物。[0003]蜂蜜中抗生素检测技术目前主要包括以下几种：[0004]微生物法，是用于测定抗生素效价的生物学定量方法之一。我国也建立了杯碟法检测蜂蜜中红霉素和青霉素的国家标准。原理简单、操作便捷是微生物学测定法的最大优势，但检测灵敏度过低是其最大缺陷。[0005]酶联免疫分析法(ELISA)，是一种让抗体与酶结合物结合，然后通过显色来检测的方法。这种方法简单易行，具有特异性强、灵敏度高等优点，已经越来越多的应用于蜂蜜中抗生素残留的检测，我国也有酶联免疫法检测蜂蜜中氯霉素和四环素的国家标准。但是，免疫测定法提供的待测物组成或结构方面的信息太少，一般不具备多残留分析能力；分析过程影响因素众多且不易控制，结果易出现假阳性，方法难以标准化；方法建立过程复杂，研究周期长，某些待测物的半抗