一种中国蜂胶黄酮提取物及制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106892889A(43)申请公布日2017.06.27(21)申请号201710068269.7A61K35/644(2015.01)(22)申请日2017.02.07(71)申请人浙江大学地址310058浙江省杭州市西湖区余杭塘路866号(72)发明人胡福良程晓雨郑宇斐张翠平郑火青(74)专利代理机构杭州求是专利事务所有限公司33200代理人赵杭丽(51)Int.Cl.C07D311/32(2006.01)C07D311/30(2006.01)C07D311/40(2006.01)A61P35/00(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图3页(54)发明名称一种中国蜂胶黄酮提取物及制备方法和应用(57)摘要本发明提供一种中国蜂胶黄酮提取物，其中总黄酮的重量百分含量以芦丁计为54.3％～89.3％，其中含量最高的5种黄酮单体依次为：短叶松素、松属素、短叶松素-3-乙酸酯、白杨素和高良姜素。通过由石油醚、乙醇、石油醚-乙酸乙酯等有机溶剂分步提取分离纯化制备而成。本发明提供的蜂胶黄酮提取物化学成分明确、总黄酮含量高，与现有的蜂胶提取物相比，具有提取物中总黄酮含量高、提取物中黄酮类化合物成分明确，该提取物对癌细胞具有明显的抑制癌细胞作用，能诱导癌细胞调亡，可在制备抗肿瘤药物中的应用。CN106892889ACN106892889A权利要求书1/1页1.一种中国蜂胶黄酮提取物，其特征在于，提取物中总黄酮的重量百分含量以芦丁计，在54.3％～89.3％之间，该总黄酮提取物含量最高的5种黄酮单体依次为：短叶松素、松属素、短叶松素-3-乙酸酯、白杨素和高良姜素。2.权利要求1所述的中国蜂胶黄酮提取物的制备方法，其特征在于，通过以下步骤实现：(1)石油醚除杂：粉碎中国蜂胶后完全浸泡于石油醚中24h，搅拌均匀，过滤，自然挥干，得到的蜂胶毛胶颗粒，并将石油醚回收利用；(2)超声波辅助提取：取步骤⑴得到的蜂胶毛胶颗粒，按料液比1:5～1:15g/mL的比例，用75～95％的乙醇溶液提取2～4次，每次提取15～45min，过滤，合并滤液，并通过旋转蒸发仪和鼓风式烘箱挥干溶剂至恒重，蒸发浓缩至净膏状，得蜂胶黄酮粗提物；(3)硅胶薄层色谱分离：以200-300目的硅胶作蜂胶黄酮进行静态吸附剂，4:1、3:1、2:1(v/v)石油醚-乙酸乙酯双相溶剂为硅胶柱层析洗脱剂，且每个体积比洗脱3个柱体积，蜂胶与硅胶的质量比为1:35，洗脱流速为2mL/min，利用旋转蒸发仪、氮吹仪和冷冻干燥机进行浓缩、干燥；(4)硅胶薄层色谱分离：取步骤(2)得到的蜂胶净膏配成5mg/mL的乙醇溶液，在硅胶板上点样，并置于展开槽中展开，10min后，取出自然晾干，并于254nm下观察和测量Rf值，选取Rf值在0.25～0.35之间且无拖尾现象的作为最佳体积比的双溶剂体系；(5)硅胶柱层析纯化：将步骤(2)得到的蜂胶净膏配置成20mg/mL的乙醇溶液，与质量比为1:35的硅胶粉混合均匀，挥干乙醇后倒入硅胶层析柱中，铺上一层海砂，先用石油醚冲洗，算出一个柱体积，然后依次加入5:1、4:1、3:1或4:1、3:1、2:1的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂体系进行分步洗脱，每个梯度冲洗3个柱体积，控制流速为1～2mL/min，每1/3个柱体积收集一管，合并Rf值相近的蜂胶黄酮洗脱液；(6)浓缩干燥：通过观察洗脱液的颜色及在254nm下的Rf值，先利用旋转蒸发仪挥去黄酮含量较高组的溶剂，再利用无水乙醇反复冲洗，去除上层混杂的树胶，最后在氮吹仪、冷冻干燥机下干燥至恒重，得到精制的蜂胶黄酮提取物。3.根据权利要求2所述的一种中国蜂胶黄酮提取物的制备方法，其特征在于，步骤(2)得到的蜂胶黄酮粗提物，蜂胶黄酮粗提物的总黄酮含量从蜂胶毛胶中的9.41％提高到20.3～28.6％。4.根据权利要求2所述的一种中国蜂胶黄酮提取物的制备方法，其特征在于，步骤(3)条件下，总黄酮含量从24.76％提高到54.3％～89.3％。5.根据权利要求2所述的一种中国蜂胶黄酮提取物的制备方法，其特征在于，步骤(5)所用的硅胶粉为200～300目，挥干乙醇后倒入硅胶层析柱中，并用增氧泵夯实，表面平整后铺上一层海砂。6.根据权利要求1所述的一种中国蜂胶黄酮提取物在制备抗肿瘤药物中的应用。2CN106892889A说明书1/6页一种中国蜂胶黄酮提取物及制备方法和应用技术领域[0001]本发明属于天然产物中活性成分的研究领域，具体而言，涉及一种中国蜂胶黄酮提取物及在抗肿瘤方面的的应用。背景技术[0002]蜂胶是工蜂采集植物树脂等分泌物与其上颚腺、蜡腺等分泌物混合形成的胶粘性物质。研究表明，蜂胶作为一种应用历史悠久的天然药品和保健品，具有抗氧化、抗