一种测定巴西蜂胶软胶囊中阿替匹林C含量的高效液相色谱测定方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106918661A(43)申请公布日2017.07.04(21)申请号201710093233.4(22)申请日2017.02.21(71)申请人江苏江大源生态生物科技股份有限公司地址212000江苏省镇江市镇江高新技术产业开发园区扬帆路2号(72)发明人吴黎明仲延龙沈井旺张莉梅婷周娟(74)专利代理机构上海海颂知识产权代理事务所(普通合伙)31258代理人陈丽君(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)权利要求书1页说明书5页(54)发明名称一种测定巴西蜂胶软胶囊中阿替匹林C含量的高效液相色谱测定方法(57)摘要本发明提供了一种测定巴西蜂胶软胶囊中阿替匹林C含量的高效液相色谱测定方法。采用碱解的方法破坏软胶囊外壳，用酸度调节剂调节pH≤4.0后，用无水乙醇在超声波上提取。本发明采用的方法可以有效测定巴西蜂胶软胶囊中阿替匹林C的含量，方法准确度和灵敏度高，重现性好。CN106918661ACN106918661A权利要求书1/1页1.一种测定巴西蜂胶软胶囊中阿替匹林C含量的高效液相色谱测定方法，其特征在于，包括下述步骤：1)样品的预处理；直接称取一粒软胶囊置于均质器中进行高速均质，均质器转速大于5000rpm；2)样品的碱解；将均质物置于烧杯中，加入碱液；在水浴锅中碱解，水浴温度为30℃～100℃，待样品彻底溶解后，继续水解0.5H；3）样品的酸化和乙醇提取；将碱解后的样品置于室温放凉至室温，加入酸度调节剂酸化，直至使得溶液pH小于4.0，然后加入无水乙醇进行超声波提取，提取频率40-100Khz，最佳温度在40-60℃，提取时间20-30min，提取后使用0.45µm滤膜过滤，过滤后得超声波提取物；3）液相色谱分离；取超声波提取物上样分析，色谱条件为：流动相：甲醇：甲酸或磷酸水溶液=90～20：10～80，按体积比计；检测波长：315nm；采用梯度洗脱方式分离；色谱分析条件为：色谱柱采用C18柱；流速：0.5～1.4mL/min；柱温：15℃～35℃。2.如权利要求1所述的一种测定巴西蜂胶软胶囊中阿替匹林C含量的高效液相色谱测定方法，其中，所述所述磷酸水溶液浓度为0.1%～0.4%，按体积百分比浓度计。3.如权利要求1所述的一种测定巴西蜂胶软胶囊中阿替匹林C含量的高效液相色谱测定方法，其中，所述流动相的甲醇：磷酸水溶液体积比为48：52，所述磷酸水溶液浓度为0.3%，按体积百分比浓度计。4.如权利要求1所述的一种测定巴西蜂胶软胶囊中阿替匹林C含量的高效液相色谱测定方法，其中，所述碱解使用的碱液为氢氧化钠溶液浓度为0.5%～30%，按质量百分比浓度计；或氢氧化钾溶液浓度为0.5%～30%，按质量百分比浓度计。5.如权利要求1所述的一种测定巴西蜂胶软胶囊中阿替匹林C含量的高效液相色谱测定方法，其中，所述酸度调节剂选自磷酸、盐酸、硫酸、甲酸或乙酸中的一种。2CN106918661A说明书1/5页一种测定巴西蜂胶软胶囊中阿替匹林C含量的高效液相色谱测定方法技术领域[0001]本发明涉及一种巴西蜂胶软胶囊中阿替匹林C含量的高效液相色谱测定方法，更具体是涉及一种用于测定主要由巴西蜂胶、色拉油、明胶、甘油、水、蜂蜡、卵磷脂等材料制成的巴西蜂胶软胶囊中阿替匹林C含量的高效液相色谱方法。背景技术[0002]巴西蜂胶（外文名：BrazilianBeePropolis），是指产于巴西的蜂胶，因其外观与成分等与世界其他地区的蜂胶有较大差别，且巴西蜂胶作用明确，药理研究充分而备受世人关注，是世界上品质最好的蜂胶。根据植物学来源和化学成分，巴西蜂胶可分为12类。某些样品符合“巴西蜂胶”，但并不意味着物理、化学和生物特性的相同，且巴西蜂胶分布全国，有着广泛的植物多样性和复杂的化学成分变化。近年来关于巴西蜂胶的研究实际上是来自东南地区的（第十二类），也被称为“绿蜂胶”，其主要植物来源为分布在巴西东南和南部的酒神菊属植物BaccharisdracunculifoliaDC。巴西蜂胶是世界公认的高品质蜂胶，因为巴西蜂胶含有更多的萜烯、多酚类以及黄酮类化合物，且具有独特的自然香味。巴西绿蜂胶中含有独特的阿替匹林C（ArtepillinC）成分，它是巴西蜂胶中的一类重要的生理活性成分，且目前尚未在其他地区蜂胶中检测到。研究发现阿替匹林C对各种培养的肿瘤细胞和转移的癌细胞具有强的细胞杀灭作用。运用低剂量的阿替匹林C对试验的肿瘤细胞就表现出明显的抑制生长作用，尤其对快速生长的细胞有特别显著的细胞杀灭作用。在培养基中加入阿替匹林C时，对人胃癌细胞、人肺癌细胞和鼠结肠癌细胞，就显示出抑制这些细胞生长的作用。由于阿替匹林C的功效，以及比较高的含量，已被作为公认的巴西蜂胶的主要的质