一种绿蜂胶中酚酸类成分的鉴定方法及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109917065A(43)申请公布日2019.06.21(21)申请号201910302237.8(22)申请日2019.04.16(71)申请人汤臣倍健股份有限公司地址519090广东省珠海市金湾区三灶科技工业园星汉路19号(72)发明人孙圣伟何健刘美娟刘春基殷光玲张旭光李坤平(74)专利代理机构广州致信伟盛知识产权代理有限公司44253代理人彭玲(51)Int.Cl.G01N30/88(2006.01)G01N30/06(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图8页(54)发明名称一种绿蜂胶中酚酸类成分的鉴定方法及其应用(57)摘要本发明公开了一种绿蜂胶中酚酸类成分的鉴定方法及其应用，将绿蜂胶或绿蜂胶乙醇提取物用甲醇超声提取，经微孔膜过滤，得到分析供试液，采用UPLC-ESI-qTOF-MS进行测定，确定绿蜂胶中酚酸类成分。本发明首次建立了绿蜂胶中酚酸类成分的鉴定方法，样品以甲醇超声提取，并采用超高压液相色谱-质谱联用方法（UPLC-ESI-qTOF-MS）进行测定，ESI离子源下的正负离子模式可以较准确的确定蜂胶中酚酸类的成分，具有检测时间快，灵敏度和准确度较佳、稳定性强，操作简单，易于实施等优点，为绿蜂胶及绿蜂胶产品的质量控制提供了一种新的方法。CN109917065ACN109917065A权利要求书1/1页1.一种绿蜂胶中酚酸类成分的鉴定方法，其特征在于，将绿蜂胶或绿蜂胶乙醇提取物用甲醇超声提取，经微孔膜过滤，得到分析供试液，采用UPLC-ESI-qTOF-MS进行测定，确定绿蜂胶中多种酚酸类成分。2.根据权利要求1所述的一种绿蜂胶中酚酸类成分的鉴定方法，其特征在于，所述绿蜂胶或绿蜂胶乙醇提取物与甲醇的质量体积比为：0.1-0.5g：10ml。3.根据权利要求1所述的一种绿蜂胶中酚酸类成分的鉴定方法，其特征在于，所述超声提取的时间为20-60min。4.根据权利要求1所述的一种绿蜂胶中酚酸类成分的鉴定方法，其特征在于，所述UPLC-ESI-qTOF-MS色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速为0.2-0.5mL/min；柱温：30℃；进样量：2.00μL；流动相A：0.1-0.3%甲酸水溶液；流动相B：甲醇；梯度洗脱程序如下表所示：。5.根据权利要求1所述的一种绿蜂胶中酚酸类成分的鉴定方法，其特征在于，所述UPLC-ESI-qTOF-MS质谱条件为：电喷雾离子源，正负离子模式，雾化气为氮气，质谱检测范围：MS/100~1700；MS/MS：50~1000；干燥气压：30-50PSI，温度320℃，流速8-11L/min，空细管电压：3000-4000V；锥孔气流速：10-15L/min，温度350℃；离子源温度：100-250℃。6.根据权利要求1所述的一种绿蜂胶中酚酸类成分的鉴定方法，其特征在于，确定的绿蜂胶中多种酚酸类成分分别为：绿原酸、咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、咖啡酸苯乙酯、阿特匹林C、酒神菊素。7.根据权利要求1-6任一项所述的一种绿蜂胶中酚酸类成分的鉴定方法在绿蜂胶质量检测中的应用。2CN109917065A说明书1/5页一种绿蜂胶中酚酸类成分的鉴定方法及其应用技术领域[0001]本发明属于绿蜂胶的质量检测技术领域，具体涉及一种绿蜂胶中酚酸类成分的鉴定方法及其应用。背景技术[0002]巴西绿蜂胶种类多，具有较好的生物学活性，是世界上品质最好的蜂胶，从而引起国内外研究者的广泛关注。目前绿蜂胶也越来越广泛地应用于医药、食品、化妆品等领域，主要品种有纯绿蜂胶、绿蜂胶粉等等。受植物的品系及采集地地理环境以及加工过程等影响，蜂胶的化学成分复杂。市场上的绿蜂胶及其产品缺乏统一的质量控制标准，导致质量监管部门以及生产经营企业无法对绿蜂胶的质量进行有效的监督和控制。[0003]曾有研究报道测定了绿蜂胶中黄酮类成分，包括高良姜素、芦丁、杨梅酮、山奈素、柯因等成分，以黄酮类成分的含量作为质控指标。但绿蜂胶的主要成分为酚酸类化合物，黄酮类化合物的含量较低，因此，仅仅通过总黄酮的含量来控制蜂胶的质量还远远不够。[0004]CN105929074A公开了一种巴西绿蜂胶质量控制方法，其采用高效液相色谱法测定了6个评价指标成分的含量。但其检测时间长达90min，效率低，且溶剂耗量大，不经济。因此，开发一种精准、快速的鉴定绿蜂胶中酚酸类化合物的方法显得非常之必要，以期形成有效的绿蜂胶质量控制方法，为市场上的绿蜂胶产品提供参考依据。发明内容[0005]鉴于此，本发明的目的在于提供一种绿蜂胶中酚酸类成分的鉴定方法，该方法可以快速、准确地鉴定蜂胶中的酚酸类成分，为绿蜂胶及绿蜂胶产品的质量控制提供了一种新的方法。[0006]本发明是通