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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110791435A(43)申请公布日2020.02.14(21)申请号201911160787.7(22)申请日2019.11.23(71)申请人厦门承葛生物科技有限公司地址361000福建省厦门市厦门火炬高新区(翔安)产业区翔星路88号台湾科技企业育成中心W605A室申请人厦门大学(72)发明人陈章然肖传兴许鸿志任建林张帮周杨晓宁(51)Int.Cl.C12N1/04(2006.01)C12N1/20(2006.01)C12R1/01(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图7页(54)发明名称一种低温冻存保存液(57)摘要本发明提供了一种低温冻存保存液,包括重量百分比的组份如下:3-15%的可食用保存物质、85-97%的生理盐水,所述可食用保存物质选自甘油、葡萄糖、蜂蜜、山梨糖醇、蔗糖、脱脂牛奶中的一种或多种。在菌群移植过程中,使用甘油来保存菌群,一方面可能会患者头晕、恶心及腹泻等症状;另一方面,去除菌液中的甘油时需要反复离心洗涤,这既使操作步骤变得繁琐又使得菌体因为曝氧及机械损伤等引起活菌比例下降。本发明采用可食用保存物质,降低了患者在菌群移植过程的不良反应,同时避免了去除菌液中甘油的繁琐过程,确保活菌比例。CN110791435ACN110791435A权利要求书1/1页1.一种低温冻存保存液,其特征在于,所述低温冻存保存液包括重量百分比的组份如下:3-15%的可食用保存物质、85-97%的生理盐水,所述可食用保存物质选自甘油、葡萄糖、蜂蜜、山梨糖醇、蔗糖、脱脂牛奶中的一种或多种。2.根据权利要求1所述生物样品冻存保存方法,其特征在于,所述可食用保存物质由甘油、葡萄糖、蜂蜜、山梨糖醇、蔗糖、脱脂牛奶等体积混合而成。3.根据权利要求1所述生物样品冻存保存方法,其特征在于,所述可食用保存物质为山梨糖醇。4.根据权利要求3所述生物样品冻存保存方法,其特征在于,所述低温冻存保存液包括7%-12%的山梨糖醇。5.根据权利要求1所述生物样品冻存保存方法,其特征在于,所述生理盐水为0.9%浓度的NaCl水溶液。6.一种使用权利要求1-5所述低温冻存保存液制备的菌群移植物,其特征在于,所述菌群移植物由下列重量份的原料组成:菌种3.5-5重量份、低温冻存保存液0.7-1.1重量份。7.根据权利要求6所述菌群移植物,其特征在于,所述菌种为从健康供体分离的粪菌。8.根据权利要求7所述菌群移植物,其特征在于,所述粪菌的提取方法如下:取100~200g的供体粪便溶解于750mL~1L的0.9%NaCl溶液中,使用粪便分析前处理仪对其进行处理,去除残渣,获得粪菌30-40g。2CN110791435A说明书1/5页一种低温冻存保存液技术领域[0001]本发明涉及一种低温冻存保存液,具体涉及一种菌群移植过程中使用的低温冻存保存液。背景技术[0002]近年来关于肠道菌群的研究不断涌现,肠道菌群在人类健康中的作用也越来越得到人们关注。人体肠道菌群种类多达1000余种,细菌总数多达100万亿,是宿主细胞数量的10倍。肠道菌群主要分布于结肠。结肠菌数量为1012个/g肠内容物,而回肠菌、空肠菌和十二指肠菌依次为107个/g肠内容物、104个/g肠内容物、103个/g肠内容物。居于远端肠道内的菌群紧贴肠黏膜表面,并与上皮细胞粘连,形成细菌生物膜菌群,从而影响肠道的通透性。同时,还与营养物质的吸收、分布、代谢、排泄以及肠道免疫系统密切相关。随着人们对肠道菌群研究的加深,人体微生态系统与人类健康和疾病的关系得以更加清晰,一方面精神系统、呼吸系统、代谢系统及消化道系统等疾病的发生与发展与肠道菌群紊乱密切相关,另一方面通过干预人体肠道微生态调节紊乱的肠道菌群至平衡状态也能延缓疾病的进程,如菌群移植。[0003]菌群移植(FMT)就是将健康人粪便中的功能菌群,移植到患者胃肠道内,重建具有正常功能的肠道菌群,实现肠道及肠道外疾病的治疗。在国际合作组对此词进行统一之前,少数情况下被译为“粪菌移植”、“肠菌治疗”和“肠菌移植”或“肠微生态移植”。2013年菌群移植技术已经被美国食品药品监督管理局批准用于治疗复发性难辨梭状芽孢杆菌感染(Clostridiumdifficileinfection,CDI)的治疗,同年也被美国《时代》杂志评选为“十大医学突破”之一。越来越多的基础科学和临床研究表明,菌群移植技术对治疗炎症性肠病、肠易激综合征、便秘、肥胖及糖尿病等慢性代谢疾病都有其独到的优势。2017年,肝病领域顶级期刊《Hepatology》以封面文章刊登了来自厦门大学附属中山医院团队关于肠菌移植治疗慢性乙型肝炎的重要研究结果。该研究中证实肠菌移植(IMT)对于乙肝e抗原(HBeAg)阳性慢性乙型