富硒大米中有机硒、蛋白硒、多糖硒或RNA硒含量测定方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN103217407A*(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CNCN103217407103217407A(43)申请公布日2013.07.24(21)申请号201310135560.3(22)申请日2013.04.18(71)申请人衢州市质量技术监督检测中心地址324012浙江省衢州市下张开发区乐园592号(72)发明人祝华明方建军张旭郑睿行鲍利锋龚鸿萍方芳夏爱萍(74)专利代理机构杭州赛科专利代理事务所33230代理人曹绍文(51)Int.Cl.G01N21/64(2006.01)G01N1/28(2006.01)权权利要求书2页利要求书2页说明书5页说明书5页附图1页附图1页(54)发明名称富硒大米中有机硒、蛋白硒、多糖硒或RNA硒含量测定方法(57)摘要本发明涉及富硒大米中硒形态分析的检测方法，尤其是涉及一种富硒大米中有机硒、蛋白硒、多糖硒或RNA硒的检测方法，所述测定方法包括下列步骤：（1）样品的制备：将待检测的富硒大米粉，密封储存备用；①有机硒的提取：采用透析法；②蛋白硒的提取；③多糖硒的提取；④RNA硒的提取；（2）硒含量的测定，采用氢化物原子荧光法测定，测定条件为：负高压：340V；灯电流：100mA；原子化温度：800℃；炉高：8mm；载气流速500mL/min；屏蔽气流速：1000mL/min；延迟时间：1s；读数时间：10s；加液时间：8s；进样体积：2mL；（3）数据处理。本发明的检测方法具有灵敏度高、准确性好，操作简单的优点。CN103217407ACN103274ACN103217407A权利要求书1/2页1.富硒大米中有机硒、蛋白硒、多糖硒或RNA硒含量测定方法，其特征在于，所述测定方法包括下列步骤：（1）样品的制备：将待检测的富硒大米粉碎获得粒度为100目的富硒大米干粉，密封储存备用；①有机硒的提取：称取上述富硒大米干粉1.00g，加入5~10ml超纯水，进一步研磨使富硒大米干粉充分破裂，定量转移至透析袋中，用超纯水透析24h，将透析后的样品取出，于12000rpm条件下离心15min获得沉淀，所述沉淀真空干燥得有机硒m1g；②蛋白硒的提取：称取上述富硒大米干粉10.00g，于500ml三角瓶中，加入0.05mol/LNaOH溶液100ml振荡2h得混合液，将混合液于12000rpm条件下离心15min，取上清液，加入0.1mol/LHCl调节pH至5.5，再次于12000rpm条件下离心15min得沉淀，将所述沉淀真空干燥得蛋白硒m2g；③多糖硒的提取：称取上述富硒大米干粉2.00g，加入100ml0.5mol/LNaOH溶液，于80℃水浴加热2h提取多糖，然后于12000rpm条件下离心15min，取上清液用氯仿-正丁醇溶液洗涤3次，所述氯仿与正丁醇的体积比为24:1，然后加入无水乙醇至溶液最终乙醇浓度为80%，静置24h，收集沉淀，将所述沉淀真空干燥得多糖硒m3g；④RNA硒的提取：称取上述富硒大米干粉10.00g，加入200ml0.025mol/LNaOH溶液摇振荡45min，然后用3mol/L盐酸调pH至7.0，搅拌10min后加热至90℃，保温10min后冷却至10℃，于12000rpm离心15min，取上清液用6mol/L盐酸调pH至2.5，5℃冷藏静置过夜，再次于12000rpm离心15min，收集沉淀加入1~2滴氨水，用30ml蒸馏水溶解，用氯仿-正丁醇溶液洗涤3次，所述氯仿与正丁醇的体积比为24:1，将得到的水相烘干获得RNA硒m4g；（2）硒含量的测定①标准曲线：按0、4、8、12、16、20μg/L的浓度梯度绘制标准曲线；②消化液制备：分别称取上述提取获得的有机硒、蛋白硒、多糖硒和RNA硒0.3g于50ml三角瓶中，加10ml由HNO3和HClO4按体积比4：1混合制得混合酸，冷消化过夜，次日加热消化，当溶液变为清亮无色并伴有白烟出现时，再继续加热至剩余体积2ml左右，冷却，再加5ml6mol/L盐酸，继续加热至溶液变为清亮无色并伴有白烟出现，冷却，转移定容至50ml，获得消化液；③测定：分别取上述消化液各2ml于10ml比色管中，加入浓盐酸2ml，加水定容至10ml，混匀后采用氢化物原子荧光法测定，依次获得峰面积荧光值X1、X2、X3、X4，将峰面积荧光值X1、X2、X3、X4分别带入标准曲线获得有机硒、蛋白硒、多糖硒和RNA硒消化液硒浓度为Y1、Y2、Y3、Y4；（3）数据处理①富硒大米中有机硒含量=Y1*0.25÷0.3*m1÷富硒大米质量，其中富硒大米质量为1.00g；②富硒大米中蛋白硒含量=Y2*0.25÷0.3*m2÷富硒大米质量，其中富硒大米质量为10.00g；③富硒大米中多糖硒含量=Y3*0.25