一种嗜酸乳杆菌活菌制剂及其制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN101892188A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CNCN101892188101892188A(43)申请公布日2010.11.24(21)申请号201010191693.9A23L2/52(2006.01)(22)申请日2010.05.28A61K35/74(2006.01)A61P31/12(2006.01)(71)申请人广州立达尔生物科技有限公司C12R1/23(2006.01)地址510663广东省广州市高新技术产业开发区科学城科学大道182号C2区第三层302单元(72)发明人陶正国李清雄林向剑邝金媚(74)专利代理机构广州粤高专利商标代理有限公司44102代理人何淑珍(51)Int.Cl.C12N1/21(2006.01)C12N15/74(2006.01)A23K1/16(2006.01)A23L1/30(2006.01)权利要求书1页说明书2页(54)发明名称一种嗜酸乳杆菌活菌制剂及其制备方法和应用(57)摘要本发明涉及一种可耐受胃酸环境并进入肠道定植、正常生长代谢时产生乳酸和乙酸、造成肠道低pH环境、从而抑制有害菌在人或动物肠道的生长和繁殖的嗜酸乳杆菌活菌制剂，由一种携带有表达人或动物各种特异性的干扰素或白介素家族中的一种或几种基因工程嗜酸乳杆菌制成。其制备方法包括：在重组蛋白N末端连接原核细胞信号肽，采用分泌型表达载体并以抗性基因作筛选标记；克隆干扰素或白介素成熟蛋白基因构建重组质粒；用电穿孔法导入感受态嗜酸乳杆菌后进行筛选；得到的基因工程嗜酸乳杆菌的浓缩液中添加载体后低温干燥，或者添加保护剂后冷冻干燥制备。所述嗜酸乳杆菌活菌制剂可用于制备预防和治疗病毒性疾病的制剂或药物。CN10892ACN101892188ACCNN110189218801892189A权利要求书1/1页1.一种嗜酸乳杆菌活菌制剂，其特征在于由一种携带有表达人或动物各种特异性的干扰素或白介素家族中的一种或几种基因工程嗜酸乳杆菌制成，制剂中含嗜酸乳杆菌活菌体数量为107-1011cfu/g。2.根据权利要求1所述的嗜酸乳杆菌活菌制剂，其特征在于其基因工程嗜酸乳杆菌是在重组蛋白N末端连接原核细胞信号肽，采用分泌型表达载体并以抗性基因作筛选标记；克隆干扰素或白介素成熟蛋白基因构建重组质粒；用电穿孔法导入感受态嗜酸乳杆菌后筛选得到。3.权利要求1或2所述嗜酸乳杆菌活菌制剂的制备方法，其特征在于包括如下步骤：(1)用基因克隆常规手段，在重组蛋白N末端连接原核细胞信号肽，采用分泌型表达载体并以抗性基因作筛选标记；克隆干扰素或白介素成熟蛋白基因构建重组质粒；用电穿孔法导入感受态嗜酸乳杆菌后进行筛选，得到性状稳定的基因工程嗜酸乳杆菌活菌；(2)步骤(1)得到的基因工程嗜酸乳杆菌的浓缩液中添加载体后低温20-40℃干燥，或者步骤(1)得到的嗜酸乳杆菌浓缩液中添加保护剂后冷冻干燥制备，制剂中含嗜酸乳杆菌活菌体数量为107-1011cfu/g。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于步骤(2)中所述载体是植物性载体或矿质载体；其中植物性载体是淀粉，矿质载体包括磷酸钙，磷酸氢钙和沸石粉中的一种或几种；所述保护剂是脱脂奶粉，蔗糖和海藻糖中的一种或几种。5.权利要求1或2所述嗜酸乳杆菌活菌制剂在制备预防和治疗病毒性疾病的制剂或药物中的应用。2CCNN110189218801892189A说明书1/2页一种嗜酸乳杆菌活菌制剂及其制备方法和应用技术领域[0001]本发明涉及一种用于预防和治疗病毒性疾病的制剂，具体是一种嗜酸乳杆菌活菌制剂及其制备方法和应用。背景技术[0002]病毒性疾病一直困扰畜禽养殖业。随着生物技术的发展，目前有多种细胞因子通过基因工程菌得以表达并制成制剂，如猪、鸡、牛干扰素和白介素等。目前，利用分子生物学技术构建基因工程菌株来防治畜禽传染病等已取得很大进展，例如，免疫增强剂是通过基因工程技术构建了高效表达猪干扰素(α、β和γ)的工程酵母菌株，基因工程抗菌肽是利用基因工程技术构建表达抗菌肽cecA-mil、magainin及其突变体的工程毕赤酵母菌株。[0003]公开号为CN1589776A、名称为“一种微囊化酵母及其应用”的专利申请提出，采用微囊化基因工程酵母菌，通过进入人体消化道生长代谢并分泌蛋白药物，用于治疗人体某些疾病。此外，大肠杆菌和枯草芽孢杆菌作为一种益生菌，目前也被用于食品级表达系统的研究。[0004]现有的采用大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和酵母菌作为宿主菌制备的用于预防和治疗畜禽病毒性疾病的制剂存在如下缺陷：[0005](1)蛋白产物纯化方法繁琐、纯化成本高昂；[0006](2)为保证蛋白的生物学活性及稳定性，制剂需冷链运输和低温保存。发明内容[0007]本发明的目的在于针对现有技术存在